Hongcheng Wang, BU XU
Centru di l'applicazione R & D
Introduzione
Sicondu e polarità relative di fase staziunale è a ferme munita, cromatia li li li li li li li li li liquivanu in cromatografia di fase normale (NPC) è Cromatografia di fase revered (RPC). Per a RPC, a polarità di a fasa mobile hè più forte di quella di a fase staziunale. RPC hè diventatu u più adupratu in modi di separazione di cromatografia liquidu per via di a so alta efficienza, a bona risoluzione è u mecanismu di retenzione chjaru. Dunque RPC hè adattatu per a separazione è a purificazione di vende un compiu polari o ilruttici, culo di palcusragliote, grino, pipata, chì amino usati, usando C18, c8, incontato c8, c4, c1, Fhenil, Cyano, Amino, Etc trà Quelli Gruppi funzionali legati, i più usati sò c18. Hè stimatu chì più di 80% di RPC sò avà aduprendu a fase di u ligame C18. Dunque C18 Cnomatografia colonna di Cromatografia hè diventata di colonna supplezzione per ogni laboratoriu.
Ancu se C18 di colonna di una larga gamma di cantazioni di cantabilità, parenu assai polixi o assai hydrophil, regulianu In RPC, i solventi di l'elicinamentu cumunemente utilizatu secondu a so polarità: l'acqua <metanol <acetonitrile <etanol <tetrakrofuran <isopropanol. Per assicurà a bona retenzione à a colonna per questi mostri (forti polari o altamente idrophilic), alta proporzione di u sistema aquente hè necessariu cum'è a fase mobile. Tuttavia, quandu aduprate u sistema di pura acqua d'acqua (acqua pura o una figura sale pura, a fase celleria, evità l'acqua stopa, a posta insantata in a capacità istantaneu di a colonna o mancu nisuna retenzione. Stu fenominu hè chjamatu "Collapse di Fase Hydrophobica" (cum'è mostra in a parte sinistra di a figura 1). Ancu se sta situazione hè reversibile quandu a colonna hè lavata cù solventi organiche cum'è metanol o acetostrile, pò ancu causà danni à a colonna. Dunque, hè necessariu di prevene chì sta situazione passa.
Figura 1. U diagrama schematicu di e fasi ligate nantu à a superficia di a colonna in Silica in Colonna C18 (manca) è C18Aq colonna (diritta).
Per indirizzà i prublemi sopra citati, i combustibili di l'imballaggio cromatograficu anu fattu migliurà tecniche. Unu di sti migliori facenu qualchì mudificazioni nantu à a superficia di a magazina di silica, cume l'intruduzzione di i gruppi di cyano di hydrophilicu (cumu vistu in a più bona parte di a Figura 1), per fà a ricerca di a silenfu. Cusì i catene C18 nantu à a superficia di silica puderia esse cumplettamente allargata sottu à e cundizioni altamente attuali è a fase di fase Hydrophobica puderia esse evitata. Queste colonne C1ILI Modifiche anu chjamati a colonne C18 di chjamati Aqueous, chjami colonne, chì sò pensati per e cundizioni d'elicu di altu attu di u quadru è pò tollerà u sistema aquente. I colonne c18q sò stallati in a separazione è a prificata di u fonodasti forti polari, cumpresi a acidu organici, pepledides, i nucleosidi è di e vitamine d'acqua.
Disaltà hè unu di e dispunibuli tipici di coloni tipici in a purificazione C18AQ in a purificante di flash per mostri di sali è di buffer in u soldu di e mostra in studii successive. In questu post, u fcf blue brillante cù a polarità forti era usata cum'è a mostra è purificate nantu à a colonna C18Aq. U solvente di mostra hè stata rimpiazzata da una suluzione organica da a suluzione di buffer, dunque facilitendu a seguente evaporazione rotaria cum'è salvezza di salvezza è opera. D'altronde, a purezza di a mostra era bluccatu raccucendu alcune impurità in u esempiu.
Sezione sperimentale
Figura 2. A struttura chimica di a mostra.
U FCF Blue Brillanti hè stata aduprata cum'è a mostra in questu post. A puvità di a scelta preva hè statu 86% è a struttura chimica di u scelta hè statu dimustratu in a figura 2. Per preparà a suluzione blu di brillanti è scuzzulate bè per diventà una suluzione completamente chjara. A suluzione di mostra hè stata injecta in a colonna flash da un injector. A configurazione sperimentale di a purificazione flash hè listata in u tavulinu 1.
| Strumentu | Machine di Sepabean ™2 | |||
| Cartucci | 12 G Sepaflash C18 Rp Cartash Cartagione (Silica sferica, 20 - 45 μm, 100 Å, nome d'utilizatore: sw-122-012-sp) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartasge (45 μM, 100 Å, numeru d'ordine: sw-522-012-SP (Aq12-SP (Aq12-SP (Aq)) | ||
| Lunghezza d'onda | 254 nm | |||
| Fase mobile | Solventu A: Acqua Solvent B: metanol | |||
| Rate di flussu | 30 ml / min | |||
| Carica di mostra | 300 mg (billante fcf blu cù a purezza di u 86%) | |||
| Gradoente | Tempu (CV) | Solventu B (%) | Tempu (CV) | Solventu B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17,5 | 100 | 17,5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Risultati è discussione
Una segaflash C18AQ RP Flash Cartrige hè stata aduprata per a mostra disaltrata è a purificazione. U gradiente di u passu hè stata utilizata in quale l'acqua pura hè stata aduprata cum'è a fasa mobile à l'iniziu di l'eluzione è eseguite per 10 volumi di colonna (CV). Comu mostra in a Figura 3, quandu utilizate l'acqua pura cum'è a fase mobile, a mostra hè stata mantenuta completamente in u cartuccia di flash. In seguitu, u metanol in a fasa mobile hè stata aumentata direttamente à u 100% è u gradiente hè statu mantinutu per 7.5 CV. A mostra hè stata eluta da 11,5 à 13,5 CV. In e frazioni racoltazioni, a suluzione di mostra hè stata rimpiazzata da a suluzione di buffer di Nah2po4 à Methanol. Paragunendu cun suluzione altamente aquosa, metanol hè statu assai più faciule esse eliminatu da evaporazione rotaria in u passu sussegwente, chì facilite a seguente ricerca.
Figura 3. U cromatogramma flash di u mostra nantu à un cartuccia C18AQ.
Per paragunà u cumpurtamentu di a retenzione di C18AQ Cartuccia è Regule C18 Cartullu per i mostri di a forte polarità, a prova di paragone parallele hè stata realizata. Un SEPAflash C18 RP Flash Cartrige hè stata aduprata è u cromatogramma di u flash per a Figura 4. Per u rapportu C18 regulare, u rapportu di fase più tolerata hè di circa 90%. Dunque u gradiente di l'iniziu hè statu stabilitu à u 10% metanol in 90% d'acqua. Comu affissatu in a Figura 4, a causa di a fase idrofhobica di e catene C18 causata da alti rifornì a cartuccia di C18 regulare è era direttamente eliminatu da a fasa mubuliale. Per via di u risultatu, l'operazione di mostra disprezzu o a purificazione ùn pò micca esse finita.
Figura 4. U cromatogramma flash di a mostra nantu à un cartuccia di c18 regular.
Comparendu cù u gradiente lineale, l'usu di u gripiu di u passu hà i seguenti vantaghji:
1. Usu di u usu di solvente è u tempu di esecuzione per a purificazione di mostra hè ridutta.
2. I eluti di u produttu di destinazione in un piccu forte, chì riduce u voluminu di frazioni cullucate è cusì facilita a seguente evaporazione rotaria cum'è u tempu di risparmi.
3. U pruduttu recullatu hè in metanol chì hè faciule esse evaporatu, dunque u tempu di secca hè ridutta.
In cunclusione, per a purificazione di l'mostra chì hè fortemente polaria, seffa c18AQU sott'à a stanza di a scaricazione di a Systemm Slash è efficiente.
Circa a serie di semaflash serie c18 rp flash cartridges
Ci sò una seria di a Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges cun diverse specifiche da a tecnulugia di Santa di Santa?
| Numeru d'elementu | Dimensione di colonna | Rate di flussu (ml / min) | Max.pressa (psi / bar) |
| Sw-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400 / 27,5 |
| Sw-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 anni | 400 / 27,5 |
| LW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 anni | 400 / 27,5 |
| Sw-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27,5 |
| Sw-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24,0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/ 20.7 |
| SWA-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/ 20.7 |
| Sw-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabella 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridges.
Materiale per l'imballatrice: Silici alta-efficienza C18 (AQ) Silica -bondata, 20 - 45 μm, 100 å.
logy (cum'è mostra in a Tabella 2).
Tempu post: Aug-27-2018