Rui Huang, Bo Xu
Application R&D Center
Pasiuna
Ang Ion exchange chromatography (IEC) usa ka chromatographic nga pamaagi nga sagad gigamit sa pagbulag ug pagputli sa mga compound nga gipresentar sa ionic nga porma sa solusyon.Sumala sa lain-laing mga kahimtang sa bayad sa exchangeable ions, IEC mahimong bahinon ngadto sa duha ka matang, cation exchange chromatography ug anion exchange chromatography.Sa cation exchange chromatography, ang acidic nga mga grupo gigapos sa ibabaw sa separation media.Pananglitan, ang sulfonic acid (-SO3H) usa ka sagad nga gigamit nga grupo sa kusog nga pagbinayloay sa kation (SCX), nga nagbulag sa H+ ug ang negatibo nga gikargahan nga grupo -SO3- mahimo nga mag-adsorb sa ubang mga kation sa solusyon.Sa anion exchange chromatography, ang alkaline nga mga grupo gigapos sa ibabaw sa separation media.Pananglitan, ang quaternary amine (-NR3OH, diin ang R mao ang hydrocarbon nga grupo) kasagarang gigamit sa lig-on nga anion exchange (SAX), nga nagbulag sa OH- ug ang positibo nga gikargahan nga grupo -N + R3 mahimong mag-adsorb sa ubang mga anion sa solusyon, nga moresulta sa anion. pagbaylo nga epekto.
Taliwala sa mga natural nga produkto, ang mga flavonoid nakadani sa atensyon sa mga tigdukiduki tungod sa ilang papel sa pagpugong ug pagtambal sa mga sakit sa cardiovascular.Tungod kay ang mga molekula sa flavonoid acidic tungod sa presensya sa mga phenolic hydroxyl nga mga grupo, ang ion exchange chromatography usa ka alternatibo nga kapilian dugang sa naandan nga normal nga hugna o reversed phase chromatography alang sa pagbulag ug pagputli niini nga mga acidic compound.Sa flash chromatography, ang kasagarang gigamit nga separation media alang sa ion exchange mao ang silica gel matrix diin ang ion exchange nga mga grupo gigapos sa ibabaw niini.Ang kasagarang gigamit nga ion exchange mode sa flash chromatography mao ang SCX (kasagaran sulfonic acid nga grupo) ug SAX (kasagarang quaternary amine group).Sa nauna na nga gipatik nga nota sa aplikasyon nga adunay titulo nga "The Application of SepaFlash Strong Cation Exchange Chromatography Columns sa Purification of Alkaline Compounds" sa Santai Technologies, ang mga kolum sa SCX gigamit alang sa pagputli sa mga alkaline compound.Sa kini nga post, usa ka sagol nga neutral ug acidic nga mga sumbanan ang gigamit ingon nga sample aron masusi ang paggamit sa mga kolum sa SAX sa pagputli sa mga acidic compound.
Eksperimental nga Seksyon
Figure 1. Ang schematic diagram sa stationary phase nga gigapos sa ibabaw sa SAX separation media.
Sa kini nga post, gigamit ang usa ka kolum sa SAX nga giputos sa quaternary amine bonded silica (sama sa gipakita sa Figure 1).Usa ka sinagol nga Chromone ug 2,4-dihydroxybenzoic acid ang gigamit isip sample nga putli (sama sa gipakita sa Figure 2).Ang sagol nga natunaw sa methanol ug gikarga sa flash cartridge pinaagi sa usa ka injector.Ang eksperimento nga setup sa flash purification gilista sa Table 1.
Figure 2. Ang kemikal nga istruktura sa duha ka sangkap sa sampol nga sagol.
| Instrumento | SepaBean™ nga makina T | |||||
| Mga cartridge | 4 g SepaFlash Standard Series flash cartridge (irregular silica, 40 - 63 μm, 60 Å, Order number: S-5101-0004) | 4 g SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridge (irregular silica, 40 - 63 μm, 60 Å, Order number：SW-5001-004-IR) | ||||
| wavelength | 254 nm (detection), 280 nm (monitoring) | |||||
| Mobile nga hugna | Solvent A: N-hexane | |||||
| Solvent B: Ethyl acetate | ||||||
| Laygay sa agos | 30 mL/min | 20 mL/min | ||||
| Sample loading | 20 mg (usa ka sinagol nga Component A ug Component B) | |||||
| Gradient | Oras (CV) | Solvent B (%) | Oras (CV) | Solvent B (%) | ||
| 0 | 0 | 0 | 0 | |||
| 1.7 | 12 | 14 | 100 | |||
| 3.7 | 12 | / | / | |||
| 16 | 100 | / | / | |||
| 18 | 100 | / | / | |||
Mga Resulta ug Panaghisgot
Una, ang sampol nga sagol gibulag sa usa ka normal nga phase flash cartridge nga pre-packed sa regular nga silica.Ingon sa gipakita sa Figure 3, ang duha ka sangkap sa sample gikuha gikan sa cartridge sa usag usa.Sunod, usa ka SAX flash cartridge ang gigamit alang sa pagputli sa sample.Ingon sa gipakita sa Figure 4, ang acidic nga Component B hingpit nga gipabilin sa SAX cartridge.Ang neyutral nga Component A anam-anam nga gikuha gikan sa cartridge nga adunay elution sa mobile phase.
Figure 3. Ang flash chromatogram sa sample sa usa ka regular nga normal nga phase cartridge.
Figure 4. Ang flash chromatogram sa sample sa usa ka SAX cartridge.
Ang pagtandi sa Figure 3 ug Figure 4, ang Component A adunay dili managsama nga peak shape sa duha ka lain-laing flash cartridges.Aron makumpirma kung ang peak sa elution katumbas sa sangkap, magamit namon ang tibuuk nga bahin sa pag-scan sa wavelength nga gitukod sa control software sa SepaBean™ machine.Ablihi ang eksperimental nga datos sa duha ka panagbulag, i-drag ngadto sa indicator line sa time axis (CV) sa chromatogram ngadto sa pinakataas nga punto ug ang ikaduha nga pinakataas nga punto sa elution peak nga katumbas sa Component A, ug ang full wavelength spectrum niining duha. Ang mga punto awtomatik nga ipakita sa ubos sa chromatogram (sama sa gipakita sa Figure 5 ug Figure 6).Ang pagtandi sa bug-os nga wavelength spectrum data niining duha ka mga separasyon, ang Component A adunay makanunayon nga pagsuyup spectrum sa duha ka mga eksperimento.Tungod sa rason sa Component A adunay dili managsama nga peak nga porma sa duha ka lain-laing mga flash cartridges, gituohan nga adunay piho nga kahugawan sa Component A nga adunay lain-laing retention sa normal nga phase cartridge ug SAX cartridge.Busa, ang eluting sequence lahi alang sa Component A ug ang kahugawan niining duha ka flash cartridges, nga miresulta sa dili managsama nga peak shape sa chromatograms.
Figure 5. Ang bug-os nga wavelength spectrum sa Component A ug ang kahugawan nga gibulag sa normal nga phase cartridge.
Figure 6. Ang bug-os nga wavelength spectrum sa Component A ug ang kahugawan nga gibulag sa SAX cartridge.
Kung ang target nga produkto nga kolektahon mao ang neyutral nga Component A, ang buluhaton sa pagputli dali nga makompleto pinaagi sa direkta nga paggamit sa SAX cartridge para sa elution pagkahuman sa pagkarga sa sample.Sa laing bahin, kung ang target nga produkto nga kolektahon mao ang acidic nga Component B, ang capture-release nga paagi mahimong gamiton nga adunay gamay nga pag-adjust sa mga lakang sa eksperimento: kung ang sample gikarga sa SAX cartridge ug ang neutral nga Component A bug-os nga na-eluted uban sa normal nga phase organic solvents, ibalhin ang mobile phase ngadto sa methanol solution nga adunay 5% acetic acid.Ang acetate ions sa mobile phase makigkompetensya sa Component B para sa paggapos sa quaternary amine ion groups sa stationary phase sa SAX cartridge, sa ingon eluting ang Component B gikan sa cartridge aron makuha ang target nga produkto.Ang chromatogram sa sample nga gibulag sa ion exchange mode gipakita sa Figure 7.
Figure 7. Ang flash chromatogram sa Component B nga gi-elute sa ion exchange mode sa usa ka SAX cartridge.
Sa konklusyon, ang acidic o neutral nga sample mahimong paspas nga maputli pinaagi sa SAX cartridge inubanan sa normal nga phase cartridge nga naggamit sa lain-laing mga estratehiya sa pagputli.Dugang pa, uban sa tabang sa bug-os nga wavelength scanning feature nga gitukod sa control software sa SepaBean ™ machine, ang spectrum sa pagsuyup sa spectrum sa mga eluted fraction mahimong dali nga itandi ug makumpirma, makatabang sa mga tigdukiduki nga dali nga mahibal-an ang komposisyon ug kaputli sa mga eluted fraction ug sa ingon mouswag. kaepektibo sa pagtrabaho.
| Numero sa butang | Gidak-on sa Kolum | Rate sa Pag-agos (mL/min) | Max.Presyur (psi/bar) |
| SW-5001-004-IR | 5.9 g | 10-20 | 400/27.5 |
| SW-5001-012-IR | 23 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-025-IR | 38 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5001-040-IR | 55 g | 20-40 | 400/27.5 |
| SW-5001-080-IR | 122 g | 30-60 | 350/24.0 |
| SW-5001-120-IR | 180 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5001-220-IR | 340 g | 50-100 | 300/20.7 |
| SW-5001-330-IR | 475 g | 50-100 | 250/17.2
|
Talaan 2. SepaFlash Bonded Series SAX flash cartridges.Mga materyales sa pagputos: Ultra-pure nga dili regular nga SAX-bonded silica, 40 - 63 μm, 60 Å.
Para sa dugang nga impormasyon sa mga detalyadong detalye sa SepaBean™machine, o ang impormasyon sa pag-order sa SepaFlash series flash cartridges, palihug bisitaha ang among website.
Panahon sa pag-post: Nob-09-2018