Mingzu Yang, bo xu
Centre de R + D de l'aplicació
Presentació
Els antibiòtics són una classe de metabòlits secundaris produïts per microorganismes (inclosos bacteris, fongs, actinomicets) o compostos similars que es sintetitzen o semi-sintetitzats químicament. Els antibiòtics podrien inhibir el creixement i la supervivència d’altres microorganismes. El primer antibiòtic descobert per humà, penicil·lina, va ser descobert pel microbiòleg britànic Alexander Fleming el 1928. Va observar que els bacteris dels voltants del motlle no podien créixer al plat de cultiu de Staphylococcus que estava contaminat amb motlle. Va postular que el motlle ha de segregar una substància antibacteriana, que va nomenar penicil·lina el 1928. Tot i això, els ingredients actius no es van purificar en aquell moment. El 1939, la cadena Ernst i Howard Florey de la Universitat d'Oxford van decidir desenvolupar un medicament que pogués tractar infeccions bacterianes. Després de contactar amb Fleming per obtenir soques, van extreure i purificar la penicil·lina amb èxit de les soques. Per al seu èxit de desenvolupament de penicil·lina com a fàrmac terapèutic, Fleming, Chain i Florey van compartir el premi Nobel de Medicina de 1945.
Els antibiòtics s’utilitzen com a agents antibacterianos per tractar o prevenir infeccions bacterianes. Hi ha diverses categories principals d’antibiòtics utilitzats com a agents antibacterianos: antibiòtics β-lactam (inclosos la penicil·lina, la cefalosporina, etc.), els antibiòtics aminoglicòsids, els antibiòtics de macrolids, els antibiòtics de tetraciclina inclouen el cloramfenicol (antibiòtica total) i etc. semi-síntesi i síntesi total. Els antibiòtics produïts per fermentació biològica han de ser modificats estructuralment mitjançant mètodes químics a causa de l'estabilitat química, els efectes secundaris tòxics, l'espectre antibacterià i altres problemes. Després de modificar químicament, els antibiòtics podrien aconseguir un augment d’estabilitat, reducció d’efectes secundaris tòxics, ampliar l’espectre antibacterià, reduir la resistència al fàrmac, millorar la biodisponibilitat i, per tant, millorar l’efecte del tractament amb fàrmacs. Per tant, els antibiòtics semi-sintètics són actualment la direcció més popular en el desenvolupament de fàrmacs antibiòtics.
En el desenvolupament d’antibiòtics semi-sintètics, els antibiòtics tenen les propietats de baixa puresa, molts subproductes i components complexos ja que es deriven de productes de fermentació microbiana. En aquest cas, l’anàlisi i el control de les impureses en antibiòtics semi-sintètics és especialment important. Per tal d’identificar i caracteritzar eficaçment les impureses, cal obtenir una quantitat suficient d’impureses del producte sintètic d’antibiòtics semi-sintètics. Entre les tècniques de preparació de la impuresa utilitzades habitualment, la cromatografia flash és un mètode rendible amb avantatges com la quantitat de càrrega de mostra gran, baix cost, estalvi de temps, etc. La cromatografia flash ha estat cada vegada més emprada per investigadors sintètics.
En aquest post, la principal impuresa d’un antibiòtic aminoglicòsid semi-sintètic es va utilitzar com a mostra i purificada per un cartutx SEPAFlash C18AQ combinat amb la màquina SEPABEAN ™ del sistema de cromatografia Flash. El producte objectiu que complia els requisits es va obtenir amb èxit, cosa que suggereix una solució altament eficient per a la purificació d’aquests compostos.
Secció Experimental
La mostra va ser proporcionada per una empresa farmacèutica local. La mostra era una mena d’hidrats de carboni policíclics amino i la seva estructura molecular era similar amb els antibiòtics aminoglicòsids. La polaritat de la mostra era bastant alta, fent -la molt soluble en aigua. El diagrama esquemàtic de l'estructura molecular de la mostra es va mostrar a la figura 1. La puresa de la mostra crua va ser d'aproximadament el 88% tal com es va analitzar per HPLC. Per a la purificació d’aquests compostos d’alta polaritat, la mostra gairebé no es conservaria a les columnes C18 regulars segons les nostres experiències anteriors. Per tant, es va utilitzar una columna C18AQ per a la purificació de la mostra.
Figura 1. El diagrama esquemàtic de l'estructura molecular de la mostra.
Per preparar la solució de mostra, es va dissoldre una mostra de crua de 50 mg en aigua pura de 5 ml i després ultrasonitzada per tal de convertir -se en una solució completament clara. A continuació, es va injectar la solució de mostra a la columna Flash per un injector. La configuració experimental de la purificació de flaix es va incloure a la taula 1.
| Instrument | Sepabean ™ Machine 2 | |
| Cartutxos | 12 g de cartutx de flaix Sepaflash C18AQ RP (sílice esfèrica, 20-45μm, 100 Å, número de comanda ： SW-5222-012-SP (aq)) | |
| Longitud d'ona | 204 nm, 220 nm | |
| Fase mòbil | Solvent A: Aigua Solvent B: acetonitril | |
| Velocitat de flux | 15 ml/min | |
| Carrega de mostra | 50 mg | |
| Gradient | Temps (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19.0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52,0 | 80 | |
Resultats i discussió
El cromatograma flash de la mostra del cartutx C18AQ es va mostrar a la figura 2. Com es mostra a la figura 2, la mostra altament polar es va conservar efectivament al cartutx C18AQ. Després de la liofolització per a les fraccions recollides, el producte objectiu tenia una puresa del 96,2% (com es mostra a la figura 3) mitjançant l’anàlisi HPLC. Els resultats van indicar que el producte purificat es podria utilitzar més en el següent pas de recerca i desenvolupament.
Figura 2. El cromatograma flash de la mostra en un cartutx C18AQ.
Figura 3. El cromatograma HPLC del producte objectiu.
En conclusió, el cartutx de flaix SEPAFlash C18AQ RP combinat amb el sistema de cromatografia Flash Sepabean ™ podria oferir una solució ràpida i eficaç per a la purificació de mostres altament polars.
Sobre els cartutxos de flaix de Sepaflash C18AQ RP
Hi ha una sèrie de cartutxos de flaix RP RP SEPAFlash C18AQ amb diferents especificacions de la tecnologia Santai (com es mostra a la taula 2).
| Número d'article | Mida de la columna | Velocitat de flux (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Taula 2. SePaflash C18AQ RP Cartutxos de flaix. Materials d’embalatge: sílice c18 (aq) d’alta eficiència C18 (AQ), de 20 a 45 μm, 100 Å.
Per obtenir més informació sobre les especificacions detallades de la màquina Sepabean ™ o la informació de comanda de cartutxos de flash de la sèrie Sepaflash, visiteu el nostre lloc web.
Posada Posada: 26-2018 d'octubre