Rui Huang, bo xu
Centre de R + D de l'aplicació
Presentació
Un pèptid és un compost compost per aminoàcids, cadascun dels quals té propietats físiques i químiques úniques a causa dels diferents tipus i ordre de residus d'aminoàcids que constitueixen la seva seqüència. Amb el desenvolupament de síntesi química en fase sòlida, la síntesi química de diversos pèptids actius ha avançat molt. No obstant això, a causa de la composició complicada del pèptid obtingut per síntesi de fase sòlida, el producte final s'ha de purificar mitjançant mètodes de separació fiables. Els mètodes de purificació d’ús comú per a pèptids inclouen la cromatografia d’intercanvi d’ions (IEC) i la cromatografia líquida d’alt rendiment en fase invertida (RP-HPLC), que tenen els desavantatges de la baixa capacitat de càrrega de mostra Es va utilitzar tecnologies, en què es va utilitzar un cartutx SEPAFlash RP C18 per a la ràpida purificació de timopentina (TP-5) i es va obtenir el producte objectiu que complís els requisits.
Figura 1. 20 Aminoàcids comuns (reproduïts a www.bachem.com).
Hi ha 20 tipus d’aminoàcids que són comuns en la composició de pèptids. Aquests aminoàcids es poden dividir en els grups següents segons la seva polaritat i propietat àcid-base: no polar (hidrofòbica), polar (no carregat), àcid o bàsic (com es mostra a la figura 1). En una seqüència de pèptids, si els aminoàcids que constitueixen la seqüència són majoritàriament polars (com marcats en color rosa a la figura 1), com la cisteïna, la glutamina, l’asparagina, la serina, la treonina, la tirosina, etc. Aleshores aquest pèptid pot tenir una forta polaritat i ser altament soluble en aigua. Durant el procediment de purificació d’aquestes mostres de pèptid polar fortes mitjançant cromatografia en fase invertida, es produirà un fenomen anomenat col·lapse de fase hidrofòbica (consulteu una nota d’aplicació publicada anteriorment per Santai Technologies: col·lapse de fase hidrofòbica, columnes de cromatografia de fase invertida AQ i les seves aplicacions). En comparació amb les columnes C18 regulars, les columnes C18AQ millorades són més adequades per a la purificació de mostres polars o hidròfils fortes. En aquest post, es va utilitzar un pèptid polar fort com a mostra i es va purificar per una columna C18AQ. Com a resultat, el producte objectiu complia els requisits es va obtenir i es podria utilitzar en la investigació i desenvolupament següent.
| Instrument | Sèpà™màquina 2 | |||
| Cartutxos | 12 g de cartutx de flaix Sepaflash C18 RP (sílice esfèrica, 20-45 μm, 100 Å, Ordre Nunber ： SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP Cartutx de flaix (sílice esfèrica, 20-45 μm, 100 Å, número de comanda ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Longitud d'ona | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Fase mòbil | Solvent A: Aigua Solvent B: acetonitril | |||
| Velocitat de flux | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Carrega de mostra | 30 mg | |||
| Gradient | Temps (CV) | Solvent B (%) | Temps (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10,0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12,5 | 6 | 13,0 | 18 | |
| 16,5 | 10 | 14,0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15,5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18,0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29,0 | 87 | |||
Resultats i discussió
Per comparar el rendiment de purificació de la mostra de pèptid polar entre la columna C18 regular i la columna C18AQ, es va utilitzar una columna C18 regular per a la purificació flash de la mostra com a inici. Tal com es mostra a la figura 2, a causa del col·lapse de fase hidrofòbica de les cadenes C18 causades per una elevada proporció aquosa, la mostra gairebé no es va conservar al cartutx C18 regular i es va eluir directament per la fase mòbil. Com a resultat, la mostra no es va separar i es va purificar eficaçment.
Figura 2. El cromatograma flash de la mostra en un cartutx C18 regular.
A continuació, es va utilitzar una columna C18AQ per a la purificació de flaix de la mostra. Com es mostra a la figura 3, el pèptid es va conservar efectivament a la columna i després es va eluir. El producte objectiu es va separar de les impureses de la mostra crua i es va recollir. Després de la liofilització i després analitzada per HPLC, el producte purificat té una puresa del 98,2% i es podria utilitzar més per a la investigació i desenvolupament del següent pas.
Figura 3. El cromatograma flash de la mostra en un cartutx C18AQ.
En conclusió, el cartutx de flaix de Sepaflash C18AQ RP combinat amb el sistema de cromatografia flash Sepabean™La màquina podria oferir una solució ràpida i eficaç per a la purificació de mostres polars o hidrofíliques fortes.
Hi ha una sèrie de cartutxos de flaix RP RP SEPAFlash C18AQ amb diferents especificacions de la tecnologia Santai (com es mostra a la taula 2).
| Número d'article | Mida de la columna | Velocitat de flux (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Taula 2. SePaflash C18AQ RP Cartutxos de flaix. Materials d’embalatge: sílice c18 (aq) d’alta eficiència C18 (AQ), de 20 a 45 μm, 100 Å.
Per obtenir més informació sobre les especificacions detallades de la màquina Sepabean ™ o la informació de comanda de cartutxos de flash de la sèrie Sepaflash, visiteu el nostre lloc web.
Hora del lloc: 12 d'octubre de 2018