Rui Huang, Bo Xu
R & D centar za prijavu
Uvođenje
Peptid je spoj sastavljen od aminokiselina, od kojih svaka ima jedinstvena fizička i hemijska svojstva zbog različitih vrsta i redoslijeda ostataka aminokiselina koji čine njegov niz. Razvoj čvrste fazne kemijske sinteze, hemijska sinteza različitih aktivnih peptida postigla je veliki napredak. Međutim, zbog komplikovanog sastava peptida dobivenog sintezom solidne faze, konačni proizvod treba pročistiti pouzdanim metodama odvajanja. Najčešće korištene metode pročišćavanja peptida uključuju ionsku tekuću hromatografiju (IEC) i reverzirano-fazni tekućih hromatografije (RP-HPLC), visokih troškova za odvajanje, kompliciranih i skupog za razdvajanje itd. Za brzo pročišćavanje malih molekula (MW <1 kda), uspješno je objavio SANTAI tehnologije, U kojem se koristi sePaflash RP C18 uložak za brzo pročišćavanje timopentina (TP-5) i ciljni sastanak proizvoda koji su dobili zahtjeve.
Slika 1. 20 uobičajenih aminokiselina (reprodukovano sa www.bachem.com).
Ima 20 vrsta aminokiselina koje su uobičajene u sastavu peptida. Ove aminokiseline mogu se podijeliti u sljedeće grupe prema njihovoj radnoj razini i nekretninama kiseline: ne-polar (hidrofobično), polarni (neispunjeni), kiseli ili osnovni (kao što je prikazano na slici 1). U peptidnom sekvenci, ako su aminokiseline koje čine redoslijed uglavnom polarne (označene u ružičastoj boji na slici 1), poput cisteina, glutamina, šparogina, serizma, treonina, tirozina itd. Tada ovaj peptid može imati snažnu polaritet i biti vrlo rastvorljiv u vodi. Tijekom postupka pročišćavanja za ove snažne uzorke polarnih peptida, pojavit će se fenomen nazvan hidrofobni fazni kolaps (pogledajte prethodno objavljenu napomenu aplikacije sa Santai tehnologijama: hidrofobne fazne kolektove, AQ obrnuto fazne hromatografske stupce i njihove aplikacije). U usporedbi s redovnim stupcima C18, poboljšani stupci C18AQ najprikladniju su za pročišćavanje jakih polarnih ili hidrofilnih uzoraka. U ovom postu, snažan polarni peptid koristio je kao uzorak i pročišćena kolonom C18AQ. Kao rezultat, ciljni proizvod koji ispunjavaju zahtjeve dobiveni su i mogli bi se koristiti u sljedećim istraživanjima i razvoju.
| Instrument | Sepabean™Mašina 2 | |||
| Kertridži | 12 g Sepaflash C18 RP flash kertridž (sferni silika, 20 - 45 μm, 100 Å, narudžba Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP flash kertridž (sferni silika, 20 - 45 μm, 100 Å, broj narudžbe: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Talasna dužina | 254 Nm, 220 Nm | 214 nm | ||
| Mobilna faza | Solvent A: voda Solvent B: Acetonitril | |||
| Brzina protoka | 15 ml / min | 20 ml / min | ||
| Učitavanje utora | 30 mg | |||
| Gradijent | Vrijeme (CV) | Solvent B (%) | Vrijeme (min) | Solvent B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Rezultati i diskusija
Da biste uporedili performanse pročišćavanja za polarnog peptidnog uzorka između redovnog C18 stupca i stupca C18AQ, koristili smo redovan C18 stupac za pročišćavanje bljeskalice uzorak kao početak. Kao što je prikazano na slici 2, zbog urušavanja hidrofobne fazne lanca uzrokovanih visokim vodenim omjerom, uzorak je jedva zadržan u redovnom C18 ulošku i izravno je izbačen putem mobilne faze. Kao rezultat toga, uzorak nije bio efektivno odvojen i pročišćavan.
Slika 2. Flash hromatogram uzorka na redovnom C18 ulošku.
Zatim smo koristili C18AQ stupac za pročišćavanje uzorka bljeskalice. Kao što je prikazano na slici 3, peptid je učinkovito zadržan na koloni, a zatim isključen. Ciljni proizvod bio je odvojen od nečistoća u sirovom uzorku i prikupljen. Nakon liofilizacije, a zatim analiziran od strane HPLC-a, pročišćeni proizvod ima čistoću od 98,2% i može se dalje iskoristiti za sljedeću istraživanje i razvoj koraka.
Slika 3. Flash hromatogram uzorka na C18AQ kertridž.
Zaključno, Sepaflash C18AQ RP flash kertridž u kombinaciji sa bljeskalicom Chromatografski sistem Sepabean™Mašina bi mogla ponuditi brzo i efikasno rješenje za pročišćavanje jakih polarnih ili hidrofilnih uzoraka.
Postoje serija sepaflash C18AQ RP flash kertridža sa različitim specifikacijama sa Santai tehnologije (kao što je prikazano u tablici 2).
| Broj predmeta | Veličina stupca | Brzina protoka (ml / min) | Max.presure (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabela 2. Sepaflash C18AQ RP flash kertridži. Materijali za pakiranje: Visoka efikasnost sferična C18 (AQ) -Dožena silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
Za dodatne informacije o detaljnim specifikacijama Sepabean ™ mašine ili informacije o naručivanju na flash kertridžima Sepaflash serije posjetite našu web stranicu.
Vrijeme pošte: oktobar-12-2018