Hongcheng Wang, bo xu
R & D centar za prijavu
Uvođenje
Prema relativnim polaritetima stacionarne faze i mobilne faze, tečna kromatografija može se podijeliti u normalnu fazni kromatografiju (NPC) i obrnuto fazna hromatografija (RPC). Za RPC je polaritet mobilne faze jači od stacionarne faze. RPC je postao najčešće korišten u modusima odvajanja tečnih kromatografije zbog velike efikasnosti, dobre rezolucije i jasnog mehanizma zadržavanja. Stoga je RPC pogodan za razdvajanje i pročišćavanje različitih polarnih ili ne-polarnih spojeva, uključujući alkaloide, ugljikohidrate, masne kiseline, steptike, peptide, najčešće korištene matrice silikagela je vezan za različite funkcionalne grupe, uključujući C18, C8, C4, fenil, cijano, amino, itd. Među tim vezanim funkcionalnim grupama, najčešće korišteni je C18. Procjenjuje se da više od 80% RPC-a sada koristi fazu vezane C18. Stoga je stupac CH18 kromatografski stupac postao obavezan univerzalni stupac za svaku laboratoriju.
Iako se CA8 stupac može koristiti u vrlo širokom rasponu aplikacija, međutim, za neke uzorke koji su vrlo polarni ili visoko hidrofilni, redovni C18 stubovi mogu imati problema prilikom pročišćavanja takvih uzoraka. U RPC-u se najčešće korišteni otapala elucije mogu naručiti prema njihovoj polaritetu: voda <Methanol <acetonitril <etanol <tetrahydrofuran <izopropanol. Da bi se osigurao dobro zadržavanje stupca za ove uzorke (jak polarne ili visoko hidrofilne), potreban je visok udio vodenog sustava koji će se koristiti kao mobilna faza. Međutim, kada koristite čisti vodovod (uključujući čistu vodu ili čistu otopinu soli) kao mobilna faza, dugi karbonski lanac na stacionarnom fazu C18 stupca teži da se izbegne voda i miješaju se međusobno, što rezultira trenutnim smanjenjem kapaciteta za zadržavanje stupca ili čak ni za zadržavanje. Ovaj fenomen se naziva "hidrofobna faza kolaps" (kao što je prikazano u lijevom dijelu slike 1). Iako je ova situacija reverzibilna kada se stupac oprava organskim otapalima kao što su metanol ili acetonitril, to još uvijek može prouzrokovati oštećenje stupca. Stoga je potrebno spriječiti da se ta situacija dogodi.
Slika 1. Shematski dijagram vezanih faza na površini silika gela u redovnom stupcu C18 (lijevo) i C18AQ stup (desno).
Da bi se pozabavili gore navedenim problemima, proizvođači hromatografskih ambalaža izrađivali su tehnička poboljšanja. Jedna od tih poboljšanja stvara neke izmjene na površini silika matrice, poput uvođenja hidrofilnih cino grupa (kao što je prikazano u desnom dijelu slike 1), kako bi se površina silika gela napravila veća hidrofila. Stoga bi C18 lanci na površini silicije mogli biti u potpunosti prošireni u vrlo vodenim uvjetima, a bit će se izbjeći sa kolapse hidrofobne faze. Ovi modificirani C18 stubovi nazivaju se vodeni C18 stubovi, naime C18AQ stupci, koji su dizajnirani za visoko vodene uslove za eluljenje i mogu podnijeti 100% vodeni sistem. C18AQ stupci su široko primijenjeni u odvajanju i pročišćavanju jakih polarnih spojeva, uključujući organske kiseline, peptide, nukleozide i vitamini topivo u vodu.
DesAlling je jedna od tipičnih primjena C18AQ stupaca u pročišćavanju bljeskalice za uzorke, što uklanja dijelove soli ili međuspremnika u uzorku otapala kako bi se olakšala primjena uzorka u narednim studijama. U ovom postu, sjajan plavi FCF sa snažnim polaritetom korišten je kao uzorak i pročišćeni na stupcu C18AQ. Uzorak otapala zamijenjen je organskim otapalom iz puferskog rješenja, čime se olakšava sljedeća rotacijska isparavanja, kao i uštedu otapala i vremena rada. Nadalje, čistoća uzorka poboljšana je uklanjanjem nekih nečistoća u uzorku.
Eksperimentalni presjek
Slika 2. Hemijska struktura uzorka.
Briljantni plavi FCF korišten je kao uzorak u ovom postu. Čistoća sirovog uzorka bila je 86%, a hemijska struktura uzorka prikazana je na slici 2. Za pripremu rastvora uzorka, pustinca od 300 mg rastvorenog u blještavinom plavom fcf-u rastvorena je u 1 m NAH2PO4 pufer rješenje i dobro je postao potpuno jasno rješenje. Otopina uzorka je zatim ubrizgava u bljeskalicu ubrizgavačem. Eksperimentalno postavljanje pročišćavanja bljeska je navedeno u tablici 1.
| Instrument | Sepabean ™ mašina2 | |||
| Kertridži | 12 G Sepaflash C18 RP flash kertridža (sferni silika, 20 - 45 μm, 100 Å, broj narudžbe: SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP flash kertridž (sferni silika, 20 - 45 μm, 100 Å, broj narudžbe: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Talasna dužina | 254 nm | |||
| Mobilna faza | Solvent A: voda Solvent B: Metanol | |||
| Brzina protoka | 30 ml / min | |||
| Učitavanje utora | 300 mg (sjajno plava FCF sa čistoćom od 86%) | |||
| Gradijent | Vrijeme (CV) | Solvent B (%) | Vrijeme (CV) | Solvent B (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
Rezultati i diskusija
Za uzorak za uklanjanje i pročišćavanje uzoraka korišten je Sepaflash C18AQ RP flash kertridž. Korak je iskorišten u kojem se čista voda koristila kao mobilna faza na početku elucije i pokrenuta za 10 stupca (CV). Kao što je prikazano na slici 3, kada koristite čistu vodu kao mobilnu fazu, uzorak je u potpunosti zadržan na flash kertridž. Zatim je metanol u mobilnoj fazi izravno povećan na 100%, a gradijent održavan za 7.5 cv. Uzorak je izvučen sa 11,5 do 13,5 cv. U prikupljenim frakcijama, otopina uzorka zamijenjena je iz pufernog rješenja NAH2PO4 na metanol. U usporedbi s visoko vodenim otopinom, metanol je bio mnogo lakši za uklanjanje rotacijskim isparavanjem u sljedećem koraku, što olakšava sljedeća istraživanja.
Slika 3. Flash hromatogram uzorka na C18AQ kertridž.
Da biste uporedili ponašanje zadržavanja C18AQ kertridža i redovnog C18 uloška za uzorke snažne polaritet, izveden je paralelni test usporedbe. Korištena je sepaflash C18 RP flash kertridž, a bljeskalica za uzorak je prikazan na slici 4. Za redovne kemijske kertridže, najviši tolerirani vodeni omjer faze iznosi oko 90%. Stoga je gradijent početka postavljen na 10% metanola u 90% vode. Kao što je prikazano na slici 4, zbog hidrofobne fazne lanaca uzrokovanih visokim vodenim omjerom, uzorak je jedva zadržan na redovnom C18 ulošku i direktno ga je izveo mobilna faza. Kao rezultat toga, rad uzorka desvaliranja ili pročišćavanja ne može se završiti.
Slika 4. Flash hromatogram uzorka na redovnom C18 ulošku.
Upoređivanje s linearnim gradijentom, korištenje stepeništara ima sljedeće prednosti:
1. Smanjena upotreba i vrijeme izvođenja za pročišćavanje uzoraka.
2. Ciljni proizvod odlučuje u oštrom vrhuncu, što smanjuje količinu prikupljenih frakcija i na taj način olakšava sljedeću rotacijsku isparavanje kao i uštedu vremena.
3. Prikupljeni proizvod je u metanolu koji se lako ispari, čime se tiče vremena sušenja smanjeno.
Zaključno, za pročišćavanje uzorka koji je snažno polarni ili visoko hidrofilni, Sepaflash C18AQ RP flash kertridža koji kombiniraju sa pripremnim bljeskalicama System Sepabean ™ mašina može ponuditi brzo i efikasno rješenje.
O sepaflash vezivanim serijama C18 RP Flash kertridži
Postoje serija sepaflash C18AQ RP flash kertridža sa različitim specifikacijama sa Santai tehnologije (kao što je prikazano u tablici 2).
| Broj predmeta | Veličina stupca | Brzina protoka (ml / min) | Max.presure (psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400 / 27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300 / 20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250 / 17.2 |
Tabela 2. Sepaflash C18AQ RP flash kertridži.
Materijali za pakiranje: Visoka efikasnost sferična C18 (AQ) -Dožena silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (kao što je prikazano u tablici 2).
Pošta: Aug-27-2018