রুই হুয়াং, বো জু
আবেদন গবেষণা ও উন্নয়ন কেন্দ্র
ভূমিকা
একটি পেপটাইড হল অ্যামিনো অ্যাসিডের সমন্বয়ে গঠিত একটি যৌগ, যার প্রতিটিরই অনন্য ভৌত ও রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য রয়েছে কারণ অ্যামিনো অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশের বিভিন্ন প্রকার এবং ক্রম তার ক্রম গঠন করে।কঠিন পর্যায়ের রাসায়নিক সংশ্লেষণের বিকাশের সাথে, বিভিন্ন সক্রিয় পেপটাইডের রাসায়নিক সংশ্লেষণ দুর্দান্ত অগ্রগতি করেছে।যাইহোক, কঠিন ফেজ সংশ্লেষণ দ্বারা প্রাপ্ত পেপটাইডের জটিল রচনার কারণে, চূড়ান্ত পণ্যটি নির্ভরযোগ্য পৃথকীকরণ পদ্ধতি দ্বারা শুদ্ধ করা উচিত।পেপটাইডগুলির জন্য সাধারণত ব্যবহৃত পরিশোধন পদ্ধতিগুলির মধ্যে রয়েছে আয়ন এক্সচেঞ্জ ক্রোমাটোগ্রাফি (আইইসি) এবং বিপরীত-ফেজ উচ্চ কার্যক্ষমতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (আরপি-এইচপিএলসি), যার অসুবিধাগুলি কম নমুনা লোডিং ক্ষমতা, বিচ্ছেদ মিডিয়ার উচ্চ ব্যয়, জটিল এবং ব্যয়বহুল পৃথকীকরণ সরঞ্জাম, ইত্যাদি। ছোট অণু পেপটাইডের দ্রুত পরিশোধনের জন্য (MW < 1 kDa), একটি সফল অ্যাপ্লিকেশন কেস পূর্বে সান্তাই টেকনোলজিস দ্বারা প্রকাশিত হয়েছিল, যেখানে একটি SepaFlash RP C18 কার্টিজ থাইমোপেনটিন (TP-5) এর দ্রুত পরিশোধনের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং লক্ষ্য পণ্য প্রয়োজনীয়তা পূরণ প্রাপ্ত করা হয়েছে.
চিত্র 1. 20টি সাধারণ অ্যামিনো অ্যাসিড (www.bachem.com থেকে পুনরুত্পাদিত)।
20 ধরনের অ্যামিনো অ্যাসিড রয়েছে যা পেপটাইডের সংমিশ্রণে সাধারণ।এই অ্যামিনো অ্যাসিডগুলিকে তাদের মেরুতা এবং অ্যাসিড-বেস বৈশিষ্ট্য অনুসারে নিম্নলিখিত গ্রুপে ভাগ করা যেতে পারে: অ-পোলার (হাইড্রোফোবিক), পোলার (আনচার্জড), অম্লীয় বা মৌলিক (চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে)।একটি পেপটাইড ক্রমানুসারে, যদি ক্রম গঠনকারী অ্যামিনো অ্যাসিডগুলি বেশিরভাগই পোলার হয় (চিত্র 1-এ গোলাপী রঙে চিহ্নিত), যেমন সিস্টাইন, গ্লুটামিন, অ্যাসপারাজিন, সেরিন, থ্রোনাইন, টাইরোসিন ইত্যাদি, তাহলে এই পেপটাইড শক্তিশালী হতে পারে। পোলারিটি এবং জলে অত্যন্ত দ্রবণীয়।বিপরীত-ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা এই শক্তিশালী পোলার পেপটাইড নমুনাগুলির পরিশোধন প্রক্রিয়া চলাকালীন, হাইড্রোফোবিক ফেজ পতন নামক একটি ঘটনা ঘটবে (সান্তাই টেকনোলজিস দ্বারা পূর্বে প্রকাশিত একটি অ্যাপ্লিকেশন নোট পড়ুন: হাইড্রোফোবিক ফেজ কোল্যাপস, একিউ রিভার্সড ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম এবং দ্য দ্য)।নিয়মিত C18 কলামগুলির সাথে তুলনা করে, উন্নত C18AQ কলামগুলি শক্তিশালী পোলার বা হাইড্রোফিলিক নমুনাগুলির পরিশোধনের জন্য সবচেয়ে উপযুক্ত।এই পোস্টে, একটি শক্তিশালী পোলার পেপটাইড নমুনা হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল এবং একটি C18AQ কলাম দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল।ফলস্বরূপ, প্রয়োজনীয়তা পূরণের লক্ষ্য পণ্যটি প্রাপ্ত হয়েছিল এবং নিম্নলিখিত গবেষণা ও উন্নয়নে ব্যবহার করা যেতে পারে।
| যন্ত্র | সেপাবিন™মেশিন 2 | |||
| কার্তুজ | 12 গ্রাম SepaFlash C18 RP ফ্ল্যাশ কার্টিজ (গোলাকার সিলিকা, 20 - 45 μm, 100 Å, অর্ডার নংবার: SW-5222-012-SP) | 12 গ্রাম SepaFlash C18AQ RP ফ্ল্যাশ কার্টিজ (গোলাকার সিলিকা, 20 - 45 μm, 100 Å, অর্ডার নম্বর：SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| তরঙ্গদৈর্ঘ্য | 254 এনএম, 220 এনএম | 214 এনএম | ||
| মোবাইল ফেজ | দ্রাবক A: জল দ্রাবক বি: অ্যাসিটোনিট্রিল | |||
| প্রবাহ হার | 15 মিলি/মিনিট | 20 মিলি/মিনিট | ||
| নমুনা লোড হচ্ছে | 30 মিলিগ্রাম | |||
| গ্রেডিয়েন্ট | সময় (সিভি) | দ্রাবক বি (%) | সময় (মিনিট) | দ্রাবক বি (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ফলাফল এবং আলোচনা
নিয়মিত C18 কলাম এবং C18AQ কলামের মধ্যে পোলার পেপটাইড নমুনার পরিশোধন কর্মক্ষমতা তুলনা করার জন্য, আমরা শুরু হিসাবে নমুনার ফ্ল্যাশ পরিশোধনের জন্য একটি নিয়মিত C18 কলাম ব্যবহার করেছি।চিত্র 2-এ দেখানো হয়েছে, উচ্চ জলীয় অনুপাতের কারণে C18 চেইনের হাইড্রোফোবিক ফেজ পতনের কারণে, নমুনাটি সবেমাত্র নিয়মিত C18 কার্টিজে রাখা হয়েছিল এবং মোবাইল ফেজ দ্বারা সরাসরি বিলুপ্ত হয়েছিল।ফলস্বরূপ, নমুনা কার্যকরভাবে পৃথক এবং শুদ্ধ করা হয়নি।
চিত্র 2. নিয়মিত C18 কার্টিজে নমুনার ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম।
এরপরে, আমরা নমুনার ফ্ল্যাশ পরিশোধনের জন্য একটি C18AQ কলাম ব্যবহার করেছি।চিত্র 3 তে দেখানো হয়েছে, পেপটাইড কার্যকরভাবে কলামে ধরে রাখা হয়েছিল এবং তারপরে বের করে দেওয়া হয়েছিল।লক্ষ্য পণ্যটি কাঁচা নমুনার অমেধ্য থেকে পৃথক করা হয়েছিল এবং সংগ্রহ করা হয়েছিল।লাইওফিলাইজেশন এবং তারপর HPLC দ্বারা বিশ্লেষণের পরে, বিশুদ্ধ পণ্যটির বিশুদ্ধতা 98.2% এবং পরবর্তী ধাপের গবেষণা ও উন্নয়নের জন্য আরও ব্যবহার করা যেতে পারে।
চিত্র 3. একটি C18AQ কার্টিজে নমুনার ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম।
উপসংহারে, SepaFlash C18AQ RP ফ্ল্যাশ কার্টিজ ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেমের সাথে মিলিত SepaBean™মেশিন শক্তিশালী পোলার বা হাইড্রোফিলিক নমুনা পরিশোধনের জন্য একটি দ্রুত এবং কার্যকর সমাধান দিতে পারে।
সান্তাই টেকনোলজির বিভিন্ন স্পেসিফিকেশন সহ SepaFlash C18AQ RP ফ্ল্যাশ কার্টিজের একটি সিরিজ রয়েছে (সারণি 2 এ দেখানো হয়েছে)।
| আইটেম নম্বর | কলামের আকার | প্রবাহ হার (mL/মিনিট) | সর্বোচ্চ চাপ (psi/বার) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 গ্রাম | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 গ্রাম | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 গ্রাম | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 গ্রাম | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 গ্রাম | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 গ্রাম | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 গ্রাম | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 গ্রাম | 40-80 | 250/17.2 |
সারণি 2. SepaFlash C18AQ RP ফ্ল্যাশ কার্টিজ।প্যাকিং উপকরণ: উচ্চ-দক্ষতা গোলাকার C18(AQ)-বন্ডেড সিলিকা, 20 - 45 μm, 100 Å।
SepaBean™ মেশিনের বিস্তারিত স্পেসিফিকেশন বা SepaFlash সিরিজের ফ্ল্যাশ কার্টিজের অর্ডার সংক্রান্ত তথ্যের জন্য, অনুগ্রহ করে আমাদের ওয়েবসাইট দেখুন।
পোস্ট সময়: অক্টোবর-12-2018