রুই হুয়াং, বো জু
অ্যাপ্লিকেশন আর অ্যান্ড ডি সেন্টার
ভূমিকা
একটি পেপটাইড হ'ল একটি যৌগ যা অ্যামিনো অ্যাসিড সমন্বয়ে গঠিত, যার প্রত্যেকটিরই বিভিন্ন ধরণের এবং অ্যামিনো অ্যাসিডের অবশিষ্টাংশের ক্রমের ক্রমটি গঠনের ক্রমের কারণে অনন্য শারীরিক এবং রাসায়নিক বৈশিষ্ট্য রয়েছে। শক্ত পর্যায়ের রাসায়নিক সংশ্লেষণের বিকাশের সাথে, বিভিন্ন সক্রিয় পেপটাইডগুলির রাসায়নিক সংশ্লেষণ দুর্দান্ত অগ্রগতি করেছে। তবে, শক্ত পর্যায়ে সংশ্লেষণ দ্বারা প্রাপ্ত পেপটাইডের জটিল রচনার কারণে, চূড়ান্ত পণ্যটি নির্ভরযোগ্য পৃথকীকরণ পদ্ধতি দ্বারা শুদ্ধ করা উচিত। পেপটাইডগুলির জন্য সাধারণত ব্যবহৃত পরিশোধন পদ্ধতিগুলির মধ্যে আয়ন এক্সচেঞ্জ ক্রোমাটোগ্রাফি (আইইসি) এবং বিপরীত-পর্যায়ের উচ্চ কার্যকারিতা তরল ক্রোমাটোগ্রাফি (আরপি-এইচপিএলসি) অন্তর্ভুক্ত রয়েছে, যার কম নমুনা লোডিং ক্ষমতা, উচ্চতর ব্যয়, কমেড এবং ব্যয়বহুল বিচ্ছেদ সরঞ্জাম ইত্যাদি) এমডব্লিউএডির জন্য দ্রুত শুদ্ধির জন্য (এমডাব্লু) যার মধ্যে একটি সেপাফ্ল্যাশ আরপি সি 18 কার্টিজ থাইমোপেন্টিন (টিপি -5) এর দ্রুত পরিশোধন (টিপি -5) এর জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল এবং প্রয়োজনীয়তাগুলি পূরণ করার লক্ষ্য পণ্যটি প্রাপ্ত হয়েছিল।
চিত্র 1। 20 সাধারণ অ্যামিনো অ্যাসিড (www.bachem.com থেকে পুনরুত্পাদন করা)।
20 ধরণের অ্যামিনো অ্যাসিড রয়েছে যা পেপটাইডগুলির রচনায় সাধারণ। এই অ্যামিনো অ্যাসিডগুলি তাদের মেরুতা এবং অ্যাসিড-বেস সম্পত্তি অনুসারে নিম্নলিখিত গ্রুপগুলিতে বিভক্ত করা যেতে পারে: নন-মেরু (হাইড্রোফোবিক), মেরু (আনচার্জড), অ্যাসিডিক বা বেসিক (চিত্র 1-এ দেখানো হয়েছে)। একটি পেপটাইড অনুক্রমের মধ্যে, যদি ক্রমটি গঠিত অ্যামিনো অ্যাসিডগুলি বেশিরভাগ মেরু (চিত্র 1 -এ গোলাপী রঙে চিহ্নিত হিসাবে চিহ্নিত) যেমন সিস্টাইন, গ্লুটামাইন, অ্যাস্পারাজিন, সেরিন, থ্রোনাইন, টাইরোসিন ইত্যাদি থাকে তবে এই পেপটাইডের একটি শক্তিশালী মেরুতা থাকতে পারে এবং পানিতে অত্যন্ত দ্রবণীয় হতে পারে। বিপরীত-পর্যায়ের ক্রোমাটোগ্রাফি দ্বারা এই শক্তিশালী মেরু পেপটাইড নমুনাগুলির জন্য পরিশোধন পদ্ধতির সময়, হাইড্রোফোবিক ফেজ ধসের নামক একটি ঘটনা ঘটবে (সান্টাই টেকনোলজিসের পূর্বে প্রকাশিত অ্যাপ্লিকেশন নোটটি উল্লেখ করুন: হাইড্রোফোবিক ফেজ ধসের, একিউ ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি কলামগুলি এবং তাদের অ্যাপ্লিকেশনগুলি)। নিয়মিত সি 18 কলামগুলির সাথে তুলনা করে, উন্নত সি 18 এ কিউ কলামগুলি শক্তিশালী মেরু বা হাইড্রোফিলিক নমুনাগুলি পরিশোধিত করার জন্য সবচেয়ে উপযুক্ত। এই পোস্টে, একটি শক্তিশালী মেরু পেপটাইড নমুনা হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল এবং একটি সি 18 এ কিউ কলাম দ্বারা পরিশোধিত হয়েছিল। ফলস্বরূপ, প্রয়োজনীয়তাগুলি পূরণ করার লক্ষ্য পণ্যটি প্রাপ্ত হয়েছিল এবং নিম্নলিখিত গবেষণা এবং বিকাশে ব্যবহার করা যেতে পারে।
| উপকরণ | সেপাবিয়ান™মেশিন 2 | |||
| কার্তুজ | 12 জি সেপাফ্ল্যাশ সি 18 আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজ (গোলাকার সিলিকা, 20-45 মিমি, 100 Å, অর্ডার নুনবার ： এসডাব্লু -5222-012-এসপি) | 12 জি সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্টিজ (গোলাকার সিলিকা, 20-45 মিমি, 100 Å, অর্ডার নম্বর ： এসডাব্লু -5222-012-এসপি (একিউ)) | ||
| তরঙ্গদৈর্ঘ্য | 254 এনএম, 220 এনএম | 214 এনএম | ||
| মোবাইল ফেজ | দ্রাবক এ: জল দ্রাবক বি: এসিটোনাইট্রাইল | |||
| প্রবাহ হার | 15 মিলি/মিনিট | 20 মিলি/মিনিট | ||
| নমুনা লোডিং | 30 মিলিগ্রাম | |||
| গ্রেডিয়েন্ট | সময় (সিভি) | দ্রাবক বি (%) | সময় (মিনিট) | দ্রাবক বি (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
ফলাফল এবং আলোচনা
নিয়মিত সি 18 কলাম এবং সি 18 এ কিউ কলামের মধ্যে পোলার পেপটাইড নমুনার জন্য পরিশোধন কর্মক্ষমতা তুলনা করতে, আমরা শুরু হিসাবে নমুনার ফ্ল্যাশ পরিশোধন জন্য একটি নিয়মিত সি 18 কলাম ব্যবহার করেছি। চিত্র 2 -তে দেখানো হয়েছে, উচ্চ জলীয় অনুপাতের কারণে সি 18 চেইনের হাইড্রোফোবিক ফেজ ধসের কারণে, নমুনাটি নিয়মিত সি 18 কার্টরিজে সবেমাত্র ধরে রাখা হয়েছিল এবং সরাসরি মোবাইল ফেজ দ্বারা বেরিয়ে এসেছিল। ফলস্বরূপ, নমুনাটি কার্যকরভাবে পৃথক করা হয়নি এবং শুদ্ধ করা হয়নি।
চিত্র 2। নিয়মিত সি 18 কার্টরিজে নমুনার ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম।
এরপরে, আমরা নমুনার ফ্ল্যাশ পরিশোধনের জন্য একটি C18AQ কলাম ব্যবহার করেছি। চিত্র 3 -তে দেখানো হয়েছে, পেপটাইড কার্যকরভাবে কলামে ধরে রাখা হয়েছিল এবং তারপরে এলিটেড আউট করা হয়েছিল। লক্ষ্য পণ্যটি কাঁচা নমুনায় অমেধ্য থেকে পৃথক করা হয়েছিল এবং সংগ্রহ করা হয়েছিল। লাইফিলাইজেশনের পরে এবং তারপরে এইচপিএলসি দ্বারা বিশ্লেষণের পরে, পরিশোধিত পণ্যটির বিশুদ্ধতা 98.2% রয়েছে এবং এটি পরবর্তী পদক্ষেপ গবেষণা এবং বিকাশের জন্য আরও ব্যবহার করা যেতে পারে।
চিত্র 3। সি 18 এ কিউ কার্তুজে নমুনার ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম।
উপসংহারে, সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্টিজ ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম সেপাবিয়ার সাথে মিলিত™মেশিন শক্তিশালী মেরু বা হাইড্রোফিলিক নমুনাগুলি পরিশোধন করার জন্য একটি দ্রুত এবং কার্যকর সমাধান সরবরাহ করতে পারে।
সান্টাই প্রযুক্তি থেকে বিভিন্ন স্পেসিফিকেশন সহ (সারণী 2 -তে দেখানো হয়েছে) সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজগুলির একটি সিরিজ রয়েছে।
| আইটেম নম্বর | কলাম আকার | প্রবাহ হার (এমএল/মিনিট) | সর্বোচ্চ.প্রেসার (পিএসআই/বার) |
| এসডাব্লু -5222-004-এসপি (একিউ) | 5.4 জি | 5-15 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-012-এসপি (একিউ) | 20 জি | 10-25 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-025-এসপি (একিউ) | 33 জি | 10-25 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-040-এসপি (একিউ) | 48 জি | 15-30 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-080-এসপি (একিউ) | 105 জি | 25-50 | 350/24.0 |
| এসডাব্লু -5222-120-এসপি (একিউ) | 155 জি | 30-60 | 300/20.7 |
| এসডাব্লু -5222-220-এসপি (একিউ) | 300 জি | 40-80 | 300/20.7 |
| এসডাব্লু -5222-330-এসপি (একিউ) | 420 জি | 40-80 | 250/17.2 |
সারণী 2। সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজ। প্যাকিং উপকরণ: উচ্চ-দক্ষতা গোলাকার সি 18 (একিউ) -বন্ডেড সিলিকা, 20-45 মিমি, 100 Å
সেপাবিয়ান ™ মেশিনের বিস্তারিত স্পেসিফিকেশন, বা সেপাফ্ল্যাশ সিরিজ ফ্ল্যাশ কার্তুজগুলিতে অর্ডার দেওয়ার তথ্য সম্পর্কে আরও তথ্যের জন্য, দয়া করে আমাদের ওয়েবসাইটটি দেখুন।
পোস্ট সময়: অক্টোবর -12-2018