হংকং ওয়াং, বো জু
অ্যাপ্লিকেশন আর অ্যান্ড ডি সেন্টার
ভূমিকা
স্টেশনারি ফেজ এবং মোবাইল ফেজের আপেক্ষিক মেরুতা অনুসারে, তরল ক্রোমাটোগ্রাফিটি সাধারণ ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি (এনপিসি) এবং বিপরীত ফেজ ক্রোমাটোগ্রাফি (আরপিসি) এ বিভক্ত করা যায়। আরপিসির জন্য, মোবাইল ফেজের মেরুতা স্থির পর্বের চেয়ে শক্তিশালী। উচ্চ দক্ষতা, ভাল রেজোলিউশন এবং স্পষ্ট ধারণক্ষমতা ব্যবস্থার কারণে আরপিসি তরল ক্রোমাটোগ্রাফি বিচ্ছেদ মোডে সর্বাধিক ব্যবহৃত একটি হয়ে উঠেছে। অতএব আরপিসি বিভিন্ন মেরু বা নন-পোলার যৌগগুলির পৃথকীকরণ এবং পরিশোধিতকরণের জন্য উপযুক্ত, যার মধ্যে ক্ষারক, কার্বোহাইড্রেট, ফ্যাটি অ্যাসিড, স্টেরয়েডস, নিউক্লিক অ্যাসিডস, অ্যামিনো অ্যাসিডস, পেপটাইডস, প্রোটিন ইত্যাদি আরপিসিতে সিএমইএল, সিটি 4, যা সিলিকা জেল ম্যাট্রিক্স, সিলিকা জেল ম্যাট্রিক্স, সিটি 4, সায়ানো, অ্যামিনো ইত্যাদি এই বন্ধনযুক্ত কার্যকরী গোষ্ঠীগুলির মধ্যে সর্বাধিক ব্যবহৃত একটি হ'ল সি 18। এটি অনুমান করা হয় যে আরপিসির 80% এরও বেশি এখন সি 18 বন্ডেড ফেজ ব্যবহার করছে। সুতরাং সি 18 ক্রোমাটোগ্রাফি কলাম প্রতিটি পরীক্ষাগারের জন্য অবশ্যই একটি সর্বজনীন কলামে পরিণত হয়েছে।
যদিও সি 18 কলামটি অ্যাপ্লিকেশনগুলির একটি বিস্তৃত পরিসরে ব্যবহার করা যেতে পারে, তবে কিছু নমুনার জন্য যা খুব মেরু বা উচ্চ হাইড্রোফিলিক, নিয়মিত সি 18 কলামগুলির সমস্যা হতে পারে যখন এই জাতীয় নমুনাগুলি শুদ্ধ করতে ব্যবহৃত হয়। আরপিসিতে, সাধারণত ব্যবহৃত এলিউশন দ্রাবকগুলি তাদের মেরুতা অনুসারে অর্ডার করা যেতে পারে: জল <মিথেনল <এসিটোনাইট্রাইল <ইথানল <টেট্রাহাইড্রোফুরান <আইসোপ্রোপানল। এই নমুনাগুলির (শক্তিশালী মেরু বা উচ্চ হাইড্রোফিলিক) জন্য কলামে ভাল ধারণার নিশ্চয়তা দেওয়ার জন্য, জলীয় সিস্টেমের উচ্চ অনুপাত মোবাইল ফেজ হিসাবে ব্যবহার করার জন্য প্রয়োজনীয়। যাইহোক, মোবাইল ফেজ হিসাবে খাঁটি জল ব্যবস্থা (খাঁটি জল বা খাঁটি লবণের দ্রবণ সহ) ব্যবহার করার সময়, সি 18 কলামের স্থির পর্যায়ে দীর্ঘ কার্বন চেইন জল এড়াতে এবং একে অপরের সাথে মিশ্রিত করে, ফলে কলামটির ধরে রাখার ক্ষমতা বা এমনকি কোনও ধারণার তাত্ক্ষণিক হ্রাস ঘটে। এই ঘটনাটিকে "হাইড্রোফোবিক ফেজ ধসের" বলা হয় (চিত্র 1 এর বাম অংশে দেখানো হয়েছে)। যদিও এই পরিস্থিতিটি যখন কলামটি মিথেনল বা অ্যাসিটোনাইট্রাইলের মতো জৈব দ্রাবকগুলির সাথে ধুয়ে ফেলা হয় তখন এটি পুনরায় পরিবর্তনযোগ্য, এটি এখনও কলামটির ক্ষতি করতে পারে। সুতরাং, এই পরিস্থিতিটি ঘটতে বাধা দেওয়া প্রয়োজন।
চিত্র 1। নিয়মিত সি 18 কলাম (বাম) এবং সি 18 এ কিউ কলামে (ডান) সিলিকা জেল পৃষ্ঠের বন্ডেড পর্যায়ের স্কিম্যাটিক ডায়াগ্রাম।
উপরে উল্লিখিত সমস্যাগুলি সমাধান করার জন্য, ক্রোমাটোগ্রাফিক প্যাকিং উপকরণ নির্মাতারা প্রযুক্তিগত উন্নতি করেছেন। এই উন্নতিগুলির মধ্যে একটি সিলিকা ম্যাট্রিক্সের পৃষ্ঠের উপর কিছু পরিবর্তন করা হচ্ছে, যেমন হাইড্রোফিলিক সায়ানো গ্রুপগুলির প্রবর্তন (চিত্র 1 এর ডান অংশে দেখানো হয়েছে), সিলিকা জেলটির পৃষ্ঠকে আরও হাইড্রোফিলিক করার জন্য। সুতরাং সিলিকা পৃষ্ঠের সি 18 চেইনগুলি অত্যন্ত জলীয় পরিস্থিতিতে সম্পূর্ণরূপে প্রসারিত হতে পারে এবং হাইড্রোফোবিক ফেজ ধসের ফলে এড়ানো যায়। এই পরিবর্তিত সি 18 কলামগুলিকে জলীয় সি 18 কলাম বলা হয়, যথা C18AQ কলামগুলি, যা অত্যন্ত জলীয় এলিউশন অবস্থার জন্য ডিজাইন করা হয়েছে এবং 100% জলীয় সিস্টেম সহ্য করতে পারে। জৈব অ্যাসিড, পেপটাইডস, নিউক্লিওসাইডস এবং জল দ্রবণীয় ভিটামিন সহ শক্তিশালী মেরু যৌগগুলির পৃথকীকরণ এবং পরিশোধন ক্ষেত্রে সি 18 এ কিউ কলামগুলি ব্যাপকভাবে প্রয়োগ করা হয়েছে।
ডেসাল্টিং হ'ল নমুনাগুলির জন্য ফ্ল্যাশ পরিশোধন সি 18 এ কিউ কলামগুলির একটি সাধারণ অ্যাপ্লিকেশন, যা পরবর্তী গবেষণায় নমুনার প্রয়োগের সুবিধার্থে নমুনা দ্রাবকটিতে লবণ বা বাফার উপাদানগুলি সরিয়ে দেয়। এই পোস্টে, শক্তিশালী মেরুতা সহ উজ্জ্বল নীল এফসিএফ নমুনা হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং সি 18 এ কিউ কলামে শুদ্ধ করা হয়েছিল। নমুনা দ্রাবকটি বাফার সলিউশন থেকে জৈব দ্রাবক দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল, এইভাবে নিম্নলিখিত রোটারি বাষ্পীভবন পাশাপাশি দ্রাবক এবং অপারেটিং সময় সংরক্ষণের সুবিধার্থে। তদ্ব্যতীত, নমুনার কিছু অমেধ্য অপসারণ করে নমুনার বিশুদ্ধতা উন্নত করা হয়েছিল।
পরীক্ষামূলক বিভাগ
চিত্র 2। নমুনার রাসায়নিক কাঠামো।
উজ্জ্বল নীল এফসিএফ এই পোস্টে নমুনা হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল। কাঁচা নমুনার বিশুদ্ধতা 86% ছিল এবং নমুনার রাসায়নিক কাঠামোটি চিত্র 2 এ দেখানো হয়েছিল। নমুনা সমাধানটি প্রস্তুত করার জন্য, 300 মিলিগ্রাম পাউডারি ক্রুড সলিড ব্রিলিয়ান্ট ব্লু এফসিএফের সলিড 1 এম NAH2PO4 বাফার দ্রবণে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং সম্পূর্ণ পরিষ্কার সমাধান হয়ে উঠতে ভাল করে কাঁপানো হয়েছিল। নমুনা সমাধানটি তখন কোনও ইনজেক্টর দ্বারা ফ্ল্যাশ কলামে ইনজেকশন করা হয়েছিল। ফ্ল্যাশ শুদ্ধিকরণের পরীক্ষামূলক সেটআপটি সারণি 1 এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে।
| উপকরণ | সেপাবিয়ান ™ মেশিন2 | |||
| কার্তুজ | 12 জি সেপাফ্ল্যাশ সি 18 আরপি ফ্ল্যাশ কার্টিজ (গোলাকার সিলিকা, 20-45 মিমি, 100 Å, অর্ডার নম্বর: এসডাব্লু -5222-012-এসপি) | 12 জি সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্টিজ (গোলাকার সিলিকা, 20-45 মিমি, 100 Å, অর্ডার নম্বর ： এসডাব্লু -5222-012-এসপি (আক)） | ||
| তরঙ্গদৈর্ঘ্য | 254 এনএম | |||
| মোবাইল ফেজ | দ্রাবক একটি ： জল দ্রাবক বি ： মিথেনল | |||
| প্রবাহ হার | 30 এমএল/মিনিট | |||
| নমুনা লোডিং | 300 মিলিগ্রাম (86%এর বিশুদ্ধতা সহ উজ্জ্বল নীল এফসিএফ) | |||
| গ্রেডিয়েন্ট | সময় (সিভি) | দ্রাবক বি (%) | সময় (সিভি) | দ্রাবক বি (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ফলাফল এবং আলোচনা
একটি সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্টিজ নমুনা ডেসাল্টিং এবং পরিশোধন জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল। স্টেপ গ্রেডিয়েন্টটি ব্যবহার করা হয়েছিল যেখানে খাঁটি জল এলিউশনের শুরুতে মোবাইল ফেজ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং 10 কলাম ভলিউম (সিভি) এর জন্য চালানো হয়েছিল। চিত্র 3 -তে দেখানো হয়েছে, মোবাইল ফেজ হিসাবে খাঁটি জল ব্যবহার করার সময়, ফ্ল্যাশ কার্টরিজে নমুনাটি সম্পূর্ণরূপে ধরে রাখা হয়েছিল। এরপরে, মোবাইল পর্যায়ে মিথেনলটি সরাসরি 100% এ বৃদ্ধি করা হয়েছিল এবং গ্রেডিয়েন্টটি 7.5 সিভির জন্য বজায় রাখা হয়েছিল। নমুনাটি 11.5 থেকে 13.5 সিভি পর্যন্ত এলিট করা হয়েছিল। সংগৃহীত ভগ্নাংশগুলিতে, নমুনা সমাধানটি NAH2PO4 বাফার সমাধান থেকে মিথেনল থেকে প্রতিস্থাপন করা হয়েছিল। অত্যন্ত জলীয় সমাধানের সাথে তুলনা করে, মিথেনল পরবর্তী পদক্ষেপে রোটারি বাষ্পীভবন দ্বারা অপসারণ করা আরও সহজ ছিল, যা নিম্নলিখিত গবেষণাকে সহজতর করে।
চিত্র 3। সি 18 এ কিউ কার্তুজে নমুনার ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম।
দৃ strong ় মেরুকরণের নমুনাগুলির জন্য সি 18 এ কিউ কার্টিজ এবং নিয়মিত সি 18 কার্টরিজের ধরে রাখার আচরণের তুলনা করার জন্য, সমান্তরাল তুলনা পরীক্ষা করা হয়েছিল। একটি সেপাফ্ল্যাশ সি 18 আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজ ব্যবহার করা হয়েছিল এবং নমুনার জন্য ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম চিত্র 4 এ দেখানো হয়েছিল। নিয়মিত সি 18 কার্তুজগুলির জন্য, সর্বোচ্চ সহনশীল জলীয় পর্যায়ের অনুপাতটি প্রায় 90%। সুতরাং 90% জলে স্টার্ট গ্রেডিয়েন্টটি 10% মিথেনল সেট করা হয়েছিল। চিত্র 4 -তে দেখানো হয়েছে, উচ্চ জলীয় অনুপাতের কারণে সি 18 চেইনের হাইড্রোফোবিক ফেজ ধসের কারণে, নমুনাটি নিয়মিত সি 18 কার্টরিজে সবেমাত্র ধরে রাখা হয়েছিল এবং সরাসরি মোবাইল ফেজ দ্বারা বেরিয়ে এসেছিল। ফলস্বরূপ, নমুনা ডেসাল্টিং বা পরিশোধন অপারেশন সম্পন্ন করা যায় না।
চিত্র 4। নিয়মিত সি 18 কার্টরিজে নমুনার ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাম।
লিনিয়ার গ্রেডিয়েন্টের সাথে তুলনা করে, ধাপের গ্রেডিয়েন্টের ব্যবহারের নিম্নলিখিত সুবিধাগুলি রয়েছে:
1। দ্রাবক ব্যবহার এবং নমুনা পরিশোধন জন্য রান সময় হ্রাস করা হয়।
2। একটি তীক্ষ্ণ শিখরে লক্ষ্য পণ্য ELUTES, যা সংগৃহীত ভগ্নাংশের পরিমাণ হ্রাস করে এবং এইভাবে নিম্নলিখিত রোটারি বাষ্পীভবনকে পাশাপাশি সময় সাশ্রয় করার সুবিধার্থে।
3। সংগৃহীত পণ্যটি মিথেনলে রয়েছে যা বাষ্পীভূত হওয়া সহজ, এইভাবে শুকানোর সময় হ্রাস করা হয়।
উপসংহারে, নমুনার পরিশোধন যা দৃ strongly ়ভাবে মেরু বা উচ্চ হাইড্রোফিলিক, সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজগুলি প্রস্তুতিমূলক ফ্ল্যাশ ক্রোমাটোগ্রাফি সিস্টেম সেপাবিয়ান ™ মেশিনটির সাথে সংমিশ্রণে একটি দ্রুত এবং দক্ষ সমাধান দিতে পারে।
সেপাফ্ল্যাশ বন্ডেড সিরিজ সি 18 আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজ সম্পর্কে
সান্টাই প্রযুক্তি থেকে বিভিন্ন স্পেসিফিকেশন সহ (সারণী 2 -তে দেখানো হয়েছে) সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজগুলির একটি সিরিজ রয়েছে।
| আইটেম নম্বর | কলাম আকার | প্রবাহ হার (এমএল/মিনিট) | সর্বোচ্চ.প্রেসার (পিএসআই/বার) |
| এসডাব্লু -5222-004-এসপি (একিউ) | 5.4 জি | 5-15 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-012-এসপি (একিউ) | 20 জি | 10-25 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-025-এসপি (একিউ) | 33 জি | 10-25 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-040-এসপি (একিউ) | 48 জি | 15-30 | 400/27.5 |
| এসডাব্লু -5222-080-এসপি (একিউ) | 105 জি | 25-50 | 350/24.0 |
| এসডাব্লু -5222-120-এসপি (একিউ) | 155 জি | 30-60 | 300/20.7 |
| এসডাব্লু -5222-220-এসপি (একিউ) | 300 জি | 40-80 | 300/20.7 |
| এসডাব্লু -5222-330-এসপি (একিউ) | 420 জি | 40-80 | 250/17.2 |
সারণী 2। সেপাফ্ল্যাশ সি 18 এ কিউ আরপি ফ্ল্যাশ কার্তুজ।
প্যাকিং উপকরণ: উচ্চ-দক্ষতা গোলাকার সি 18 (একিউ) -বন্ডেড সিলিকা, 20-45 মিমি, 100 Å
লজি (সারণী 2 তে দেখানো হয়েছে)।
পোস্ট সময়: আগস্ট -27-2018