Приложението на SepaFlash силни анионобменни хроматографски колони при пречистването на киселинни съединения

Резултати и дискусия

Първо, сместа от пробата се отделя от флаш патрон с нормална фаза, предварително опакован с обикновен силициев диоксид.Както е показано на фигура 3, двата компонента в пробата се елуират от патрона един след друг.След това се използва SAX флаш касета за пречистване на пробата.Както е показано на Фигура 4, киселинният Компонент B беше напълно запазен върху касетата SAX.Неутралният компонент А постепенно се елуира от патрона с елуирането на подвижната фаза.

Фигура 3. Флаш хроматограма на пробата върху обикновен патрон с нормална фаза.

Фигура 4. Флаш хроматограма на пробата върху SAX касета.
Сравнявайки Фигура 3 и Фигура 4, Компонент А има непостоянна пикова форма на двете различни флаш касети.За да потвърдим дали пикът на елуиране съответства на компонента, можем да използваме функцията за сканиране с пълна дължина на вълната, която е вградена в контролния софтуер на машината SepaBean™.Отворете експерименталните данни за двете разделяния, плъзнете до индикаторната линия на времевата ос (CV) в хроматограмата до най-високата точка и втората най-висока точка на пика на елуиране, съответстващ на Компонент А, и пълния спектър на дължина на вълната на тези два точките ще бъдат автоматично показани под хроматограмата (както е показано на Фигура 5 и Фигура 6).Сравнявайки данните за пълния спектър на дължината на вълната на тези две разделяния, Компонент А има последователен спектър на абсорбция в два експеримента.Поради това, че Компонент А има непостоянна пикова форма на две различни флаш касети, се спекулира, че има специфично примес в Компонент А, което има различно задържане върху касетата с нормална фаза и касетата SAX.Следователно последователността на елуиране е различна за Компонент А и примесите на тези две флаш касети, което води до непоследователна пикова форма на хроматограмите.

Фигура 5. Пълният спектър на дължината на вълната на компонент А и примесите, отделени от патрон с нормална фаза.

Фигура 6. Пълният спектър на дължината на вълната на компонент А и примесите, отделени от касетата SAX.

Ако целевият продукт, който трябва да бъде събран, е неутрален компонент А, задачата за пречистване може лесно да бъде изпълнена чрез директно използване на SAX касетата за елуиране след зареждане на пробата.От друга страна, ако целевият продукт, който трябва да бъде събран, е киселинният компонент B, начинът на улавяне-освобождаване може да бъде възприет само с лека корекция в експерименталните стъпки: когато пробата е заредена в SAX патрона и неутралния компонент A се елуира напълно с органични разтворители с нормална фаза, превключете подвижната фаза към разтвор на метанол, съдържащ 5% оцетна киселина.Ацетатните йони в подвижната фаза ще се конкурират с Компонент Б за свързване към йонните групи на кватернерния амин в стационарната фаза на патрона SAX, като по този начин се елуира Компонент В от патрона, за да се получи целевият продукт.Хроматограмата на пробата, отделена в йонообменен режим, е показана на фигура 7.

Фигура 7. Флаш хроматограма на компонент В, елуиран в йонообменен режим на SAX патрон.

В заключение, киселинната или неутралната проба може да бъде бързо пречистена от патрон SAX, комбиниран с патрон с нормална фаза, като се използват различни стратегии за пречистване.Освен това, с помощта на функцията за сканиране с пълна дължина на вълната, вградена в контролния софтуер на машината SepaBean™, характерният абсорбционен спектър на елуираните фракции може лесно да бъде сравнен и потвърден, помагайки на изследователите бързо да определят състава и чистотата на елуираните фракции и по този начин да подобрят ефективност на работата.