Прилагането на колони за хроматография на Sepaflash силен анион при пречистване на киселинни съединения

Резултати и дискусия

Първо, пробната смес се разделя с флаш касета с нормална фаза, предварително опакована с обикновен силициев диоксид. Както показват на фигура 3, двата компонента в пробата се елуират от патрона един след друг. След това е използвана сакс флаш касета за пречистване на пробата. Както показват на фигура 4, киселинният компонент В е напълно задържан на патрона на SAX. Неутралният компонент А постепенно се елуира от патрона с елуирането на подвижната фаза.

Фигура 3. Флаш хроматограмата на пробата на редовен нормален фазов касета.

Фигура 4. Флаш хроматограмата на пробата върху сакс касета.
Сравнявайки Фигура 3 и Фигура 4, компонентът А има непоследователна пикова форма на двете различни флаш касети. За да потвърдим дали пикът на елуирането съответства на компонента, можем да използваме пълната функция за сканиране на дължината на вълната, която е вградена в софтуера за управление на машината Sepabean ™. Отворете експерименталните данни на двете разделяния, плъзнете към индикаторната линия по времевата ос (CV) в хроматограмата до най -високата точка и втората най -висока точка на пика на елуиране, съответстваща на компонента А, а спектърът на пълната дължина на вълната на тези две точки ще бъде автоматично показан под хроматограмата (както е показано на фигура 5 и фигура 6). Сравнявайки данните за спектъра на пълната дължина на вълната на тези две разделяния, компонентът А има последователен абсорбционен спектър в два експеримента. Поради причината за компонента А има непоследователна пикова форма на две различни флаш касети, се спекулира, че в компонента А има специфична примеса, която има различно задържане на касетата с нормална фаза и касетата на Сакс. Следователно, елуиращата последователност е различна за компонента А и примесите върху тези две флаш касети, което води до непоследователна пикова форма на хроматограмите.

Фигура 5. Спектърът на пълната дължина на вълната на компонента А и примесите, разделени с касета с нормална фаза.

Фигура 6. Спектърът на пълната дължина на вълната на компонента А и примесите, разделени от касета SAX.

Ако целевият продукт, който ще бъде събран, е неутралният компонент А, задачата за пречистване може лесно да бъде изпълнена, като се използва директно с касетата Sax за елуиране след зареждане на пробата. От друга страна, ако целевият продукт, който ще бъде събран, е киселият компонент В, начинът на освобождаване на улавяне може да бъде приет само с леко регулиране в експерименталните стъпки: когато пробата е заредена върху сакс касетата и неутралният компонент А е напълно елуиран с нормална фаза на органични разтвори, превключва подвижната фаза към метанол разтвор, съдържащ 5% оцетна киселина. Ацетатните йони в подвижната фаза ще се конкурират с компонента В за свързване към кватернерните аминови йонни групи в стационарната фаза на Sax патрона, като по този начин елуират компонента B от патрона, за да се получи целевия продукт. Хроматограмата на пробата, разделена в режим на йонен обмен, е показана на фигура 7.

Фигура 7. Флаш хроматограмата на компонента В се елуира в режим на обмен на йони върху сакс касета.

В заключение, киселата или неутралната проба може бързо да бъде пречистена от сакс касета, комбинирана с нормална фазова касета, използвайки различни стратегии за пречистване. Освен това, с помощта на функция за сканиране на пълна дължина на вълната, вградена в контролния софтуер на Machine Sepabean ™, характерният спектър на абсорбция на елуираните фракции може лесно да бъде сравнен и потвърден, като помага на изследователите бързо да определят състава и чистотата на елуираните фракции и по този начин подобряване на ефективността на работната работа.