Rui Huang, Bo Xu
Приложението за научноизследователска и развойна дейност
Въведение
Пептидът е съединение, съставено от аминокиселини, всяка от които има уникални физически и химични свойства поради различните видове и ред на аминокиселинни остатъци, съставляващи нейната последователност. С развитието на химичен синтез на твърда фаза химическият синтез на различни активни пептиди постигна голям напредък. Въпреки това, поради сложния състав на пептида, получен чрез синтез на твърда фаза, крайният продукт трябва да бъде пречистен чрез надеждни методи за разделяне. The commonly used purification methods for peptides include ion exchange chromatography (IEC) and reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC), which have the disadvantages of low sample loading capacity, high cost of separation media, complicated and costly separation equipment, etc. For the rapid purification of small molecule peptides (MW < 1 kDa), a successful application case was previously published by Santai Technologies, in която се използва сейффлаш RP C18 касета за бързо пречистване на тимопентин (TP-5) и целевия продукт, отговарящ на изискванията.
Фигура 1. 20 Общи аминокиселини (възпроизведени от www.bachem.com).
Има 20 вида аминокиселини, които са често срещани в състава на пептидите. Тези аминокиселини могат да бъдат разделени на следните групи според тяхното свойство на полярността и киселината: неполярни (хидрофобни), полярни (незаредени), кисели или основни (както е показано на фигура 1). В пептидна последователност, ако аминокиселините, съставляващи последователността, са предимно полярни (маркирани в розов цвят на фигура 1), като цистеин, глутамин, аспарагин, серин, треонин, тирозин и др. Тогава този пептид може да има силна полярност и да бъде силно разтворим във вода. По време на процедурата за пречистване на тези силни полярни пептидни проби чрез хроматография с обърната фаза ще възникне феномен, наречен хидрофобна фазов срив (вижте предварително публикувана бележка за приложение чрез Santai Technologies: хидрофобна фазова срутване, AQ обърната фазова хроматография и техните приложения). В сравнение с редовните колони C18, подобрените колони C18AQ са най -подходящи за пречистване на силни полярни или хидрофилни проби. В този пост се използва силен полярен пептид като проба и се пречиства от колона C18AQ. В резултат на това целевият продукт отговаря на изискванията и може да се използва в следните изследвания и разработки.
| Инструмент | Сепабийски™Машина 2 | |||
| Патрони | 12 g SEPAFLASH C18 RP FLASH CARTRIDGE (сферичен силициев диоксид, 20-45 μm, 100 Å, поръчайте монасина: SW-5222-012-SP) | 12 g Sepaflash C18AQ RP флаш касета (сферичен силициев диоксид, 20-45 μm, 100 Å, номер на поръчка ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Дължина на вълната | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Мобилна фаза | Разтворител А: Вода Разтворител В: Ацетонитрил | |||
| Дебит | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Зареждане на пробата | 30 mg | |||
| Градиент | Време (CV) | Разтворител В (%) | Време (мин) | Разтворител В (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Резултати и дискусия
За да сравним ефективността на пречистване за пробата на полярната пептид между обикновената колона C18 и колоната C18AQ, използвахме обикновена колона C18 за пречистване на пробата на пробата като начало. Както е показано на фигура 2, поради хидрофобния фазов срив на веригите С18, причинени от високо водно съотношение, пробата едва се задържа на обикновената касета C18 и се елуира директно от подвижната фаза. В резултат на това пробата не е ефективно разделена и пречистена.
Фигура 2. Флаш хроматограмата на пробата на редовен касета C18.
След това използвахме колона C18AQ за пречистване на светкавицата на пробата. Както е показано на фигура 3, пептидът се запазва ефективно върху колоната и след това се елуира. Целевият продукт се отделя от примесите в суровата проба и се събира. След лиофилизация и след това анализиран чрез HPLC, пречистеният продукт има чистота 98,2% и може да бъде допълнително използвана за следваща стъпка изследване и разработки.
Фигура 3. Флаш хроматограмата на пробата върху касета C18AQ.
В заключение, флаш касета на Sepaflash C18AQ RP, комбинирана със системата за флаш хроматография сепабий™Машината може да предложи бърз и ефективен разтвор за пречистване на силни полярни или хидрофилни проби.
Има поредица от флаш касетите на Sepaflash C18AQ RP с различни спецификации от технологията Santai (както е показано в таблица 2).
| Номер на артикула | Размер на колоната | Дебит (ml/min) | Max.Pressure (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP (aq) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (aq) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (aq) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (aq) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (aq) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (aq) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (aq) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (aq) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Таблица 2. Sepaflash C18AQ RP флаш касети. Опаковъчни материали: Сферична сферична С18 (AQ) силициев диоксид, 20-45 μm, 100 Å.
За допълнителна информация относно подробни спецификации на Machine Sepabean ™ или информацията за поръчка на флаш касети от серия Sepaflash, моля, посетете нашия уебсайт.
Време за публикация: октомври-12-2018 г.