Руі Хуан, Бо Сю
Дадатак R&D Center
Уводзіны
Пептыд - гэта злучэнне, якое складаецца з амінакіслот, кожная з якіх валодае унікальнымі фізічнымі і хімічнымі ўласцівасцямі з -за розных тыпаў і парадку рэшткаў амінакіслот, якія складаюць яго паслядоўнасць. З развіццём хімічнага сінтэзу цвёрдага фазы хімічны сінтэз розных актыўных пептыдаў дасягнуў вялікага прагрэсу. Аднак з -за складанага складу пептыда, атрыманага сінтэзам цвёрдай фазы, канчатковы прадукт павінен быць ачышчаны надзейнымі метадамі падзелу. Звычайна выкарыстоўваюцца метады ачышчэння для пептыдаў ўключаюць іённую храматаграфію (IEC) і зваротную фазу высокаэфектыўнай вадкаснай храматаграфіі (RP-HPLC), якія маюць недахопы нізкай магутнасці пагрузкі ўзору, высокай кошту падзелу асяроддзя, складанага і дарагога абсталявання для падзелу і г.д. Тэхналогіі, у якіх картрыдж Sepaflash RP C18 быў выкарыстаны для хуткай ачысткі тымапентыну (TP-5), і быў атрыманы мэтавы выкананне патрабаванняў.
Малюнак 1. 20 Агульныя амінакіслоты (прайграныя з www.bachem.com).
Існуе 20 відаў амінакіслот, якія часта сустракаюцца ў складзе пептыдаў. Гэтыя амінакіслоты можна падзяліць на наступныя групы ў залежнасці ад іх палярнасці і ўласцівасці кіслотнай базы: непалярнай (гідрафобнай), палярнай (незараджанай), кіслай або асноўнай (як паказана на малюнку 1). У пептыднай паслядоўнасці, калі амінакіслоты, якія складаюць паслядоўнасць, у асноўным палярныя (як гэта адзначана ў ружовым колеры на малюнку 1), такіх як цыстэін, глутамін, аспарагін, серын, трэанін, тыразін і г.д., тады гэты пептыд можа мець моцную палярнасць і быць вельмі растваральнай у вадзе. Падчас працэдуры ачысткі гэтых моцных палярных пептыдных узораў пры дапамозе зваротнай фазы храматаграфіі з'явілася з'ява, званая гідрафобнай фазавай калапсам (звярніцеся да раней апублікаванай нататкі Santai Technologies: гідрафобная фазавая калапс, калапс зваротнай фазы і іх прымяненне). У параўнанні з звычайнымі слупкамі C18, палепшаныя слупкі C18AQ найбольш падыходзяць для ачысткі моцных палярных або гідрафільных узораў. У гэтым пасце быў выкарыстаны моцны палярны пептыд у якасці ўзору і ачышчаны слупком C18AQ. У выніку мэтавы выкананне прадукту быў атрыманы патрабаванні і можа быць выкарыстаны ў наступных даследаваннях і распрацоўках.
| Прылада | Сепабскі басейн™Машына 2 | |||
| Картрыджы | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Partridge (сферычны крэмній, 20-45 мкм, 100 Å, замовіць Nunber: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Partridge (сферычны крэмній, 20-45 мкм, 100 Å, нумар замовы: SW-5222-012-SP (aq))) | ||
| Даўжыня хвалі | 254 нм, 220 нм | 214 нм | ||
| Мабільная фаза | Растваральнік A: вада Растваральнік B: ацетонітрыл | |||
| Расход | 15 мл/мін | 20 мл/мін | ||
| Узор загрузкі | 30 мг | |||
| Градыянт | Час (рэзюмэ) | Растваральнік B (%) | Час (мін) | Растваральнік B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Вынікі і абмеркаванне
Каб параўнаць прадукцыйнасць ачысткі для палярнага ўзору пептыда паміж звычайным слупком C18 і слупком C18AQ, мы выкарыстоўвалі звычайны слупок C18 для ачысткі ўспышкі ў якасці запуску. Як паказана на малюнку 2, з -за гідрафобнага фазы калапсу ланцугоў С18, выкліканага высокім водным суадносінамі, узор практычна не захоўваўся на звычайным картрыджы С18 і быў непасрэдна элюіраваны мабільнай фазай. У выніку ўзор не быў эфектыўна аддзелены і ачышчаны.
Малюнак 2. Флэш -храматаграма ўзору на звычайным картрыджы C18.
Далей мы выкарыстоўвалі слупок C18AQ для ачысткі ўспышкі ўзору. Як паказана на малюнку 3, пептыд быў эфектыўна захаваны на калоне, а затым элюіраваўся. Мэтавы прадукт быў аддзелены ад прымешак у сырой пробе і сабраны. Пасля лиофилизации, а затым прааналізаваны ВЭЖК, вычышчаны прадукт мае чысціню 98,2% і можа быць выкарыстана дадаткова для наступных этапаў даследаванняў і распрацоўкі.
Малюнак 3. Флэш -храматаграма ўзору на картрыджы C18AQ.
У заключэнне, Sepaflash C18AQ RP Flash картрыдж у спалучэнні з сістэмай флэш -храматаграфіі Sepabean™Машына можа прапанаваць хуткае і эфектыўнае рашэнне для ачысткі моцных палярных або гідрафільных узораў.
Існуе шэраг флэш -картрыджаў Sepaflash C18AQ RP з рознымі характарыстыкамі тэхналогіі Santai (як паказана ў табліцы 2).
| Нумар прадмета | Памер калонкі | Расход (мл/мін) | Max.pressure (PSI/BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 г | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 г | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 г | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 г | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 г | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 г | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 г | 40-80 | 250/17.2 |
Табліца 2. Sepaflash C18AQ RP Flash Catridges. Упаковачныя матэрыялы: высокаэфектыўная сферычная C18 (aq) -мбаваная крэмній, 20-45 мкм, 100 Å.
Для атрымання дадатковай інфармацыі пра падрабязныя тэхнічныя характарыстыкі машыны Sepabean ™ альбо інфармацыю аб замове ў серыі Sepaflash Flash картрыджы, калі ласка, наведайце наш вэб -сайт.
Час паведамлення: кастрычнік-12-2018