Rui Huang, Bo Xu
Tətbiq Ar-Ge Mərkəzi
Giriş
Peptid, ardıcıllığını təşkil edən amin turşusu qalıqlarının müxtəlif növləri və ardıcıllığı səbəbindən hər biri unikal fiziki və kimyəvi xüsusiyyətlərə malik olan amin turşularından ibarət birləşmədir.Bərk fazalı kimyəvi sintezin inkişafı ilə müxtəlif aktiv peptidlərin kimyəvi sintezi böyük irəliləyiş əldə etdi.Bununla belə, bərk faza sintezi ilə alınan peptidin mürəkkəb tərkibinə görə, son məhsul etibarlı ayırma üsulları ilə təmizlənməlidir.Peptidlər üçün ümumi istifadə edilən təmizləmə üsullarına ion mübadiləsi xromatoqrafiyası (IEC) və tərs fazalı yüksək performanslı maye xromatoqrafiyası (RP-HPLC) daxildir ki, bu üsullar aşağı nümunə yükləmə qabiliyyəti, ayırma mühitinin yüksək qiyməti, mürəkkəb və bahalı ayırma avadanlıqları, Kiçik molekullu peptidlərin (MW < 1 kDa) sürətli təmizlənməsi üçün daha əvvəl Santai Technologies tərəfindən uğurlu tətbiq nümunəsi dərc edilmişdi, burada timopentinin (TP-5) sürətli təmizlənməsi üçün SepaFlash RP C18 kartricindən istifadə edilmişdir. tələblərə cavab verən hədəf məhsul alındı.
Şəkil 1. 20 ümumi amin turşusu (www.bachem.com saytından çıxarılmışdır).
Peptidlərin tərkibində ümumi olan 20 növ amin turşusu var.Bu amin turşularını qütblərinə və turşu-əsas xassələrinə görə aşağıdakı qruplara bölmək olar: qeyri-qütblü (hidrofobik), qütblü (yüksüz), turşulu və ya əsas (Şəkil 1-də göstərildiyi kimi).Bir peptid ardıcıllığında, əgər ardıcıllığı təşkil edən amin turşuları əsasən qütblüdürsə (Şəkil 1-də çəhrayı rənglə qeyd olunduğu kimi), məsələn, Sistein, Qlutamin, Asparagin, Serin, Treonin, Tirozin və s. o zaman bu peptid güclü ola bilər. polarite və suda çox həll olur.Bu güclü qütb peptid nümunələrinin tərs fazalı xromatoqrafiya ilə təmizlənməsi proseduru zamanı hidrofobik faza çökməsi adlanan fenomen baş verəcək (Santai Technologies tərəfindən əvvəllər dərc edilmiş tətbiq qeydinə baxın: Hidrofobik Faza Çöküşü, AQ Ters Faza Xromatoqrafiya Sütunları və Onların Tətbiqləri).Adi C18 sütunları ilə müqayisədə təkmilləşdirilmiş C18AQ sütunları güclü qütb və ya hidrofilik nümunələrin təmizlənməsi üçün ən uyğundur.Bu yazıda güclü qütb peptid nümunə kimi istifadə edilmiş və C18AQ sütunu ilə təmizlənmişdir.Nəticədə, tələblərə cavab verən hədəf məhsul əldə edildi və aşağıdakı tədqiqat və inkişafda istifadə edilə bilər.
| Alət | SepaBean™maşın 2 | |||
| Patronlar | 12 q SepaFlash C18 RP flaş kartric (sferik silisium, 20 - 45 μm, 100 Å, Sifariş nömrəsi: SW-5222-012-SP) | 12 q SepaFlash C18AQ RP fleş kartric (sferik silisium, 20 - 45 μm, 100 Å, Sifariş nömrəsi: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| Dalğa uzunluğu | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobil mərhələ | Həlledici A: Su Həlledici B: Asetonitril | |||
| Axın | 15 ml/dəq | 20 ml/dəq | ||
| Nümunə yüklənməsi | 30 mq | |||
| Qradient | Vaxt (CV) | Həlledici B (%) | Vaxt (dəq) | Həlledici B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Nəticələr və Müzakirə
Normal C18 sütunu və C18AQ sütunu arasında qütb peptid nümunəsi üçün təmizlənmə performansını müqayisə etmək üçün nümunənin flaş təmizlənməsi üçün başlanğıc olaraq adi C18 sütunundan istifadə etdik.Şəkil 2-də göstərildiyi kimi, yüksək sulu nisbətin səbəb olduğu C18 zəncirlərinin hidrofobik fazasının çökməsi səbəbindən nümunə adi C18 kartuşunda çətinliklə saxlanıldı və birbaşa mobil faza ilə çıxarıldı.Nəticədə nümunə effektiv şəkildə ayrılmadı və təmizlənmədi.
Şəkil 2. Adi C18 patronda nümunənin flaş xromatoqramı.
Sonra nümunənin flaş təmizlənməsi üçün C18AQ sütunundan istifadə etdik.Şəkil 3-də göstərildiyi kimi, peptid sütunda effektiv şəkildə saxlanıldı və sonra elüt edildi.Hədəf məhsul xam nümunədəki çirklərdən ayrıldı və toplandı.Liyofilizasiyadan və sonra HPLC ilə təhlil edildikdən sonra təmizlənmiş məhsul 98,2% təmizliyə malikdir və növbəti addım tədqiqat və inkişaf üçün istifadə oluna bilər.
Şəkil 3. C18AQ kartricindəki nümunənin flaş xromatoqramı.
Yekun olaraq, SepaFlash C18AQ RP flaş kartuşu SepaBean flaş xromatoqrafiya sistemi ilə birləşdirilmişdir.™maşın güclü polar və ya hidrofilik nümunələrin təmizlənməsi üçün sürətli və effektiv həll təklif edə bilər.
Santai Texnologiyasından fərqli spesifikasiyalara malik SepaFlash C18AQ RP fleş kartricləri seriyası mövcuddur (Cədvəl 2-də göstərildiyi kimi).
| Maddə nömrəsi | Sütun Ölçüsü | Axın (ml/dəq) | Maks.Təzyiq (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 q | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 q | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 q | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 q | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 q | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 q | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 q | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 q | 40-80 | 250/17.2 |
Cədvəl 2. SepaFlash C18AQ RP fleş kartricləri.Qablaşdırma materialları: Yüksək effektiv sferik C18(AQ) ilə bağlanmış silisium, 20 - 45 μm, 100 Å.
SepaBean™ maşınının ətraflı spesifikasiyası və ya SepaFlash seriyası flaş kartricləri haqqında sifariş məlumatı haqqında əlavə məlumat üçün vebsaytımıza daxil olun.
Göndərmə vaxtı: 12 oktyabr 2018-ci il