Rui huang, bo xu
Tətbiq R & D Mərkəzi
Giriş
Bir peptid amin turşularından ibarət bir qarışıqdır, bunların hər biri ardıcıllığını əks etdirən amin turşusu qalıqlarının fərqli növləri və qaydaları səbəbindən bənzərsiz fiziki və kimyəvi xüsusiyyətlərə malikdir. Qatı faza kimyəvi sintezinin inkişafı ilə, müxtəlif aktiv peptidlərin kimyəvi sintezi böyük irəliləyiş əldə etdi. Ancaq bərk faza sintezi ilə əldə edilən peptidin mürəkkəb tərkibi səbəbindən son məhsul etibarlı ayrılıq metodları ilə təmizlənməlidir. Peptidlər üçün çox istifadə olunan təmizlənmə üsulları, kiçik molekul peptidlərinin sürətli təmizlənməsi və s. Kiçik molekul peptiklərinin sürətli təmizlənməsi və s. Thymopentin (TP-5) sürətlə təmizlənməsi üçün Sepaflash RP C18 patronundan istifadə etdiyi texnologiyalar (TP-5) və tələblərə cavab verən hədəf məhsulu əldə edildi.
Şəkil 1. 20 ümumi amin turşuları (www.bachem.com saytından çoxaldı).
Peptidlərin tərkibində ümumi olan 20 növ amin turşuları var. Bu amin turşuları, polarite və turşu bazası xüsusiyyətlərinə görə aşağıdakı qruplara bölünə bilər: qütblü (hidrofobik), qütb (işarələnməmiş), turşu və ya əsas (Şəkil 1-də göstərildiyi kimi). Bir peptid ardıcıllığında, ardıcıllığı meydana gətirən amin turşuları, sistein, glutamin, asparagine, serine, tirozin və s. Kimi güclü bir qütb, suda çox həll edilə bilər. Təcrübəli qütb peptid nümunələri üçün təmizlənmə proseduru zamanı sönməmiş faza xromatoqrafiyası, hidrofob faza çökməsi adlanan bir fenomen meydana gələcək (Santai texnologiyaları tərəfindən əvvəlcədən yayımlanan tətbiqetməyə baxın: hidrofob faza çökməsi, AQ Faza xromatoqrafiya sütunları və onların tətbiqləri). Daimi C18 sütunları ilə müqayisədə, təkmilləşdirilmiş C18AQ sütunları güclü qütb və ya hidrofilik nümunələrinin təmizlənməsi üçün ən uyğundur. Bu yazıda güclü bir qütb peptidi nümunə kimi istifadə edildi və bir C18AQ sütunu tərəfindən təmizləndi. Nəticədə, tələblərə cavab verən hədəf məhsul əldə edildi və aşağıdakı tədqiqat və inkişafda istifadə edilə bilər.
| Alət | Sepabean™ ™maşın | |||
| Patron | 12 G SepafLash C18 RP Flash patron (sferik silisium, 20 - 45 mkm, 100 μ m, Sifariş, Sifariş: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash patron (sferik silisium, 20 - 45 mkm, 100 μ, sifariş nömrəsi: SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| Dalğa uzunluğu | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobil faza | Solvent A: Su Solvent b: asetonitril | |||
| Axın | 15 ml / dəq | 20 ml / dəq | ||
| Nümunə yükləmə | 30 mq | |||
| Gradient | Zaman (CV) | Solvent b (%) | Zaman (Min) | Solvent b (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Nəticələr və müzakirə
Adi C18 sütunu və C18AQ sütunu arasında qütb peptid nümunəsi üçün təmizlənmə performansını müqayisə etmək üçün, nümunənin flaş təmizlənməsi üçün adi C18 sütundan istifadə etdik. Şəkil 2-də göstərildiyi kimi, yüksək sulu nisbətdən qaynaqlanan C18 zəncirlərinin hidrofobik fazası çökməsi səbəbindən nümunə mütəmadi C18 patronunda çətinliklə saxlanıldı və mobil faza tərəfindən birbaşa işlənmiş idi. Nəticədə nümunə effektiv şəkildə ayrılmadı və təmizlənmədi.
Şəkil 2. Nümunənin flaş xromatogramı adi C18 patronunda.
Sonrakı, nümunənin flaş təmizlənməsi üçün bir C18AQ sütunundan istifadə etdik. Şəkil 3-də göstərildiyi kimi, peptid sütunda effektiv şəkildə saxlanıldı və sonra işləndi. Hədəf məhsulu xam nümunədəki çirklərdən ayrıldı və toplanmışdı. Lyophilization və sonra HPLC tərəfindən təhlil edildikdən sonra təmizlənmiş məhsul 98,2% təmizliyi, sonrakı addım tədqiqatı və inkişafı üçün daha da istifadə edilə bilər.
Şəkil 3. Nümunənin flaş xromatogramı bir C18AQ patronunda.
Sonda Sepaflash C18AQ RP Flash patron sepabean sepabean sistemi ilə birləşdirilmiş flash patron™ ™Maşın güclü qütb və ya hidrofilik nümunələrinin təmizlənməsi üçün sürətli və effektiv bir həll təklif edə bilər.
Sepaflash C18AQ RP flash patronları Santai texnologiyasından fərqli xüsusiyyətləri (Cədvəl 2-də göstərildiyi kimi) bir sıra var.
| Maddə nömrəsi | Sütun ölçüsü | Axın (ml / dəq) | Max.Pressure (Psi / bar) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350 / 24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/12.2 |
Cədvəl 2. Sepaflash C18AQ RP Flash patronları. Qablaşdırma materialları: Yüksək səmərəli sferik C18 (AQ) -Honded silisium, 20 - 45 mkm, 100 å.
Sepabean ™ maşınının ətraflı xüsusiyyətləri və ya Sepaflash seriyası flash patronları haqqında sifariş məlumatı haqqında əlavə məlumat üçün veb saytımıza daxil olun.
Time vaxt: Oktyabr-12-2018