روي هوانغ ، بو شو
تطبيق R&D Center
مقدمة
الببتيد هو مركب يتكون من الأحماض الأمينية ، كل منها له خصائص مادية وكيميائية فريدة بسبب الأنواع المختلفة وترتيب بقايا الأحماض الأمينية التي تشكل تسلسلها. مع تطور التوليف الكيميائي للمرحلة الصلبة ، أحرز التوليف الكيميائي لمختلف الببتيدات النشطة تقدمًا كبيرًا. ومع ذلك ، نظرًا للتكوين المعقد للببتيد الذي تم الحصول عليه بواسطة تخليق الطور الصلب ، يجب تنقية المنتج النهائي عن طريق طرق فصل موثوقة. تشمل طرق التنقية شائعة الاستخدام للببتيدات كروماتوجرافيا التبادل الأيوني (IEC) وكروماتوجرافيا سائلة عالية الأداء عكسية (RP-HPLC) ، والتي لها عيوب في انخفاض قدرة التحميل للعينة ، وكانت التكلفة العالية لوسائط الانفصال ، ومعدات الفصل المعقدة والمكلفة ، وما إلى ذلك. التي تم استخدام خرطوشة Sepaflash RP C18 لتنقية Thymopentin السريع (TP-5) وتم الحصول على المنتج المستهدف الذي يفي بالمتطلبات.
الشكل 1. 20 الأحماض الأمينية الشائعة (مستنسخة من www.bachem.com).
هناك 20 نوعًا من الأحماض الأمينية الشائعة في تكوين الببتيدات. يمكن تقسيم هذه الأحماض الأمينية إلى المجموعات التالية وفقًا لخصائصها القطبية وقاعدة الحمض: غير قطبي (مسعور) ، قطبي (غير مشحون) ، الحمضي أو الأساسي (كما هو مبين في الشكل 1). في تسلسل الببتيد ، إذا كانت الأحماض الأمينية التي تشكل التسلسل في الغالب من الأقطاب القطبية (كما هو موضح باللون الوردي في الشكل 1) ، مثل السيستين ، الجلوتامين ، الهليون ، سيرين ، ثريونين ، التيروزين ، إلخ. أثناء إجراء التنقية لعينات الببتيد القطبية القوية هذه عن طريق كروماتوجرافيا المرحلة العكسية ، ستحدث ظاهرة تسمى انهيار الطور مسعور (راجع ملاحظة تطبيق تم نشرها مسبقًا من قبل Santai Technologies: انهيار الطور المسعور ، وأعمدة كروماتوجرافيا المرحلة المعززة AQ). بالمقارنة مع أعمدة C18 العادية ، فإن أعمدة C18AQ المحسنة هي الأنسب لتنقية العينات القطبية أو المحبة للماء القوية. في هذا المنشور ، تم استخدام الببتيد القطبي القوي كعينة وتنقيتها بواسطة عمود C18AQ. ونتيجة لذلك ، تم الحصول على المنتج المستهدف للمتطلبات ويمكن استخدامه في البحث والتطوير التاليين.
| أداة | سيبابان™آلة 2 | |||
| خراطيش | 12 G SEPAFLASH C18 RP Flash Cartridge (السيليكا الكروية ، 20-45 ميكرون ، 100 Å ، ترتيب نونبر ： SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge (السيليكا الكروية ، 20-45 ميكرون ، 100 Å ، رقم الطلب ： SW-5222-012-SP (AQ)) | ||
| الطول الموجي | 254 نانومتر ، 220 نانومتر | 214 نانومتر | ||
| المرحلة المتنقلة | مذيب أ: الماء المذيبات ب: أسيتونيتريل | |||
| معدل التدفق | 15 مل/دقيقة | 20 مل/دقيقة | ||
| تحميل العينة | 30 ملغ | |||
| التدرج | الوقت (السيرة الذاتية) | المذيبات ب (٪) | الوقت (دقيقة) | المذيبات ب (٪) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
النتائج والمناقشة
لمقارنة أداء التنقية لعينة الببتيد القطبية بين عمود C18 العادي وعمود C18AQ ، استخدمنا عمود C18 منتظم لتنقية الفلاش للعينة كبداية. كما هو مبين في الشكل 2 ، نظرًا لانهيار الطور مسعور لسلاسل C18 الناتجة عن نسبة مائية عالية ، تم الاحتفاظ بالعينة بالكاد على خرطوشة C18 العادية وتم إزالتها مباشرة بواسطة المرحلة المتنقلة. نتيجة لذلك ، لم يتم فصل العينة وتنقيتها بشكل فعال.
الشكل 2. كروماتوجرام الفلاش للعينة على خرطوشة C18 العادية.
بعد ذلك ، استخدمنا عمود C18AQ لتنقية الفلاش للعينة. كما هو مبين في الشكل 3 ، تم الاحتفاظ بالببتيد بفعالية على العمود ثم تخلص منه. تم فصل المنتج المستهدف عن الشوائب في العينة الخام وجمعها. بعد التجويف ثم تحليله بواسطة HPLC ، يتمتع المنتج المنقى بنقاء 98.2 ٪ ويمكن استخدامه بشكل أكبر للبحث والتطوير في الخطوة التالية.
الشكل 3. كروماتوجرام الفلاش للعينة على خرطوشة C18AQ.
في الختام ، خرطوشة فلاش Sepaflash C18AQ RP مع نظام كروماتوجرافيا الفلاش Sepabean™يمكن أن توفر الماكينة حلًا سريعًا وفعالًا لتنقية العينات القطبية أو المحبة للماء القوية.
هناك سلسلة من خراطيش فلاش Sepaflash C18AQ RP مع مواصفات مختلفة من تقنية Santai (كما هو موضح في الجدول 2).
| رقم البند | حجم العمود | معدل التدفق (مل/دقيقة) | max.pressure (PSI/BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 جم | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 غرام | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 جم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 جم | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 غرام | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 جم | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 جم | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 جم | 40-80 | 250/17.2 |
الجدول 2. Sepaflash C18AQ RP خراطيش فلاش. مواد التعبئة: C18 كروية عالية الكفاءة C18 (AQ)-السيليكا الموند ، 20-45 ميكرون ، 100 Å.
لمزيد من المعلومات حول المواصفات التفصيلية لآلة Sepabean ™ ، أو معلومات الطلب على خراطيش فلاش Sepaflash Series ، يرجى زيارة موقعنا على الويب.
وقت النشر: أكتوبر 12-2018