روي هوانغ، بو شو
مركز البحث والتطوير التطبيقي
مقدمة
الببتيد هو مركب يتكون من أحماض أمينية، كل منها له خصائص فيزيائية وكيميائية فريدة بسبب اختلاف أنواع وترتيب بقايا الأحماض الأمينية التي تشكل تسلسله.مع تطور التركيب الكيميائي في المرحلة الصلبة، حقق التركيب الكيميائي لمختلف الببتيدات النشطة تقدمًا كبيرًا.ومع ذلك، نظرًا للتركيبة المعقدة للببتيد التي تم الحصول عليها عن طريق تركيب الطور الصلب، يجب تنقية المنتج النهائي بطرق فصل موثوقة.تشمل طرق التنقية شائعة الاستخدام للببتيدات كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (IEC) والكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء ذات المرحلة العكسية (RP-HPLC)، والتي لها مساوئ انخفاض قدرة تحميل العينة، وارتفاع تكلفة وسائط الفصل، ومعدات الفصل المعقدة والمكلفة، إلخ. من أجل التنقية السريعة للببتيدات الجزيئية الصغيرة (MW < 1 كيلو دالتون)، تم نشر حالة تطبيق ناجحة مسبقًا بواسطة Santai Technologies، حيث تم استخدام خرطوشة SepaFlash RP C18 للتنقية السريعة للثيموبنتين (TP-5) و تم الحصول على المنتج المستهدف الذي يلبي المتطلبات.
الشكل 1. 20 من الأحماض الأمينية الشائعة (مستنسخة من www.bachem.com).
هناك 20 نوعًا من الأحماض الأمينية الشائعة في تركيب الببتيدات.يمكن تقسيم هذه الأحماض الأمينية إلى المجموعات التالية حسب قطبيتها وخصائصها الحمضية القاعدية: غير قطبية (كارهة للماء)، قطبية (غير مشحونة)، حمضية أو قاعدية (كما هو موضح في الشكل 1).في تسلسل الببتيد، إذا كانت الأحماض الأمينية التي تشكل التسلسل هي في الغالب أحماض قطبية (كما هو موضح باللون الوردي في الشكل 1)، مثل السيستين، والجلوتامين، والأسباراجين، والسيرين، والثريونين، والتيروزين، وما إلى ذلك، فقد يكون لهذا الببتيد تأثير قوي. قطبية وتكون شديدة الذوبان في الماء.أثناء إجراء تنقية هذه العينات الببتيدية القطبية القوية بواسطة تحليل كروماتوجرافي الطور العكسي، ستحدث ظاهرة تسمى انهيار الطور الكاره للماء (راجع مذكرة التطبيق المنشورة مسبقًا بواسطة Santai Technologies: انهيار الطور الكاره للماء، أعمدة تحليل الطور العكسي AQ وتطبيقاتها).بالمقارنة مع أعمدة C18 العادية، فإن أعمدة C18AQ المحسنة هي الأكثر ملاءمة لتنقية العينات القطبية أو المحبة للماء القوية.في هذا المنصب، تم استخدام الببتيد القطبي القوي كعينة وتنقيته بواسطة عمود C18AQ.ونتيجة لذلك، تم الحصول على المنتج المستهدف الذي يلبي المتطلبات ويمكن استخدامه في البحث والتطوير التالي.
| أداة | SepaBean™آلة 2 | |||
| خراطيش | خرطوشة فلاش SepaFlash C18 RP سعة 12 جرام (سيليكا كروية، 20 - 45 ميكرومتر، 100 Å، رقم الطلب: SW-5222-012-SP) | خرطوشة فلاش SepaFlash C18AQ RP سعة 12 جرام (سيليكا كروية، 20 - 45 ميكرومتر، 100 Å، رقم الطلب: SW-5222-012-SP(AQ)) | ||
| الطول الموجي | 254 نانومتر، 220 نانومتر | 214 نانومتر | ||
| المرحلة المتنقلة | المذيب أ: الماء المذيب ب: الأسيتونيتريل | |||
| معدل المد و الجزر | 15 مل/دقيقة | 20 مل/دقيقة | ||
| تحميل العينة | 30 ملغ | |||
| الانحدار | الوقت (السيرة الذاتية) | المذيب ب (%) | الوقت (دقيقة) | المذيب ب (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
النتائج والمناقشة
لمقارنة أداء التنقية لعينة الببتيد القطبي بين عمود C18 العادي وعمود C18AQ، استخدمنا عمود C18 عادي لتنقية فلاش العينة كبداية.كما هو مبين في الشكل 2، بسبب انهيار الطور الكاره للماء لسلاسل C18 الناتج عن ارتفاع نسبة الماء، بالكاد تم الاحتفاظ بالعينة على خرطوشة C18 العادية وتم إخراجها مباشرة بواسطة الطور المتحرك.ونتيجة لذلك، لم يتم فصل العينة وتنقيتها بشكل فعال.
الشكل 2. الرسم اللوني الفلاشي للعينة على خرطوشة C18 عادية.
بعد ذلك، استخدمنا عمود C18AQ لتنقية فلاش العينة.كما هو مبين في الشكل 3، تم الإبقاء على الببتيد بشكل فعال في العمود ثم تم إزالته.تم فصل المنتج المستهدف عن الشوائب الموجودة في العينة الخام وجمعه.بعد التجفيف بالتجميد ومن ثم تحليله بواسطة HPLC، يتمتع المنتج المنقى بنقاء يصل إلى 98.2% ويمكن استخدامه بشكل أكبر في البحث والتطوير في الخطوة التالية.
الشكل 3. اللوني فلاش للعينة على خرطوشة C18AQ.
في الختام، خرطوشة فلاش SepaFlash C18AQ RP مدمجة مع نظام الفصل اللوني للفلاش SepaBean™يمكن أن تقدم الآلة حلاً سريعًا وفعالاً لتنقية العينات القطبية أو المحبة للماء القوية.
توجد سلسلة من خراطيش فلاش SepaFlash C18AQ RP بمواصفات مختلفة عن تقنية Santai (كما هو موضح في الجدول 2).
| رقم الشيء | حجم العمود | معدل المد و الجزر (مل / دقيقة) | أقصى ضغط (رطل لكل بوصة مربعة/بار) |
| SW-5222-004-SP(أق) | 5.4 جرام | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(أق) | 20 جم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(أق) | 33 جرام | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(أق) | 48 جرام | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(أق) | 105 جرام | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(أق) | 155 جرام | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(أق) | 300 غرام | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(أق) | 420 جرام | 40-80 | 250/17.2 |
الجدول 2. خراطيش فلاش SepaFlash C18AQ RP.مواد التعبئة والتغليف: سيليكا كروية عالية الكفاءة C18(AQ)، 20 - 45 ميكرومتر، 100 أنجستروم.
لمزيد من المعلومات حول المواصفات التفصيلية لجهاز SepaBean™، أو معلومات الطلب على خراطيش الفلاش من سلسلة SepaFlash، يرجى زيارة موقعنا على الإنترنت.
وقت النشر: 12 أكتوبر 2018