هونغشنغ وانغ ، بو شو
تطبيق R&D Center
مقدمة
وفقًا للقطارات النسبية للمرحلة الثابتة والمرحلة المتنقلة ، يمكن تقسيم اللوني السائل إلى كروماتوجرافيا الطور العادي (NPC) وكروماتوجرافيا الطور المنعكس (RPC). بالنسبة إلى RPC ، يكون قطبية المرحلة المتنقلة أقوى من المرحلة الثابتة. أصبحت RPC أكثرها استخدامًا على نطاق واسع في أوضاع فصل الكروماتوغرافيا السائلة بسبب كفاءتها العالية ودقة جيدة وآلية الاحتفاظ الواضحة. لذلك فإن RPC مناسب لفصل وتنقية مختلف المركبات القطبية أو غير القطبية ، بما في ذلك قلويدات ، والكربوهيدرات ، والأحماض الدهنية ، والمنشطات ، والأحماض النووية ، والأحماض الأمينية ، والببتيدات ، والبروتينات ، وما إلى ذلك ، في RPC ، المرحلة الثابتة الأكثر شيوعًا هي مصفوفة الغيل السيليكا التي يتم ربطها مع مجموعات الوظائف المختلفة ، بما في ذلك C18 ، الأمينية ، وما إلى ذلك من بين هذه المجموعات الوظيفية المستعبدة ، أكثرها استخداما على نطاق واسع هي C18. تشير التقديرات إلى أن أكثر من 80 ٪ من RPC يستخدمون الآن المرحلة المستعبدين C18. لذلك أصبح عمود C18 كروماتوجرافيا عمود عالمي لا بد منه لكل مختبر.
على الرغم من أنه يمكن استخدام عمود C18 في مجموعة واسعة جدًا من التطبيقات ، إلا أنه بالنسبة لبعض العينات التي هي قطبية جدًا أو ماء للغاية ، قد تواجه أعمدة C18 العادية مشاكل عند استخدامها لتنقية هذه العينات. في RPC ، يمكن طلب المذيبات شطف شائعة الاستخدام وفقًا لقطرها: الماء <methanol <acetonitrile <ettrahydrofuran <isopropanol. لضمان الاستبقاء الجيد على العمود لهذه العينات (قطبية قوية أو ماء للغاية) ، من الضروري استخدام نسبة عالية من النظام المائي كمرحلة متنقلة. ومع ذلك ، عند استخدام نظام الماء النقي (بما في ذلك الماء النقي أو محلول الملح النقي) كمرحلة متنقلة ، تميل سلسلة الكربون الطويلة في المرحلة الثابتة من عمود C18 إلى تجنب الماء والخلط مع بعضها البعض ، مما يؤدي إلى انخفاض فوري في قدرة الاحتفاظ بالعمود أو حتى عدم الاحتفاظ بها. وتسمى هذه الظاهرة "انهيار الطور مسعور" (كما هو موضح في الجزء الأيسر من الشكل 1). على الرغم من أن هذا الموقف يمكن عكسه عندما يتم غسل العمود بمذيبات عضوية مثل الميثانول أو الأسيتونيتريل ، إلا أنه لا يزال يمكن أن يسبب ضررًا للعمود. لذلك ، من الضروري منع حدوث هذا الموقف.
الشكل 1. الرسم التخطيطي للمراحل المستعبدة على سطح هلام السيليكا في عمود C18 العادي (يسار) وعمود C18AQ (يمين).
لمعالجة المشكلات المذكورة أعلاه ، قام مصنعو مواد التعبئة الكروماتوغرافية بإجراء تحسينات تقنية. تتمثل إحدى هذه التحسينات في إجراء بعض التعديلات على سطح مصفوفة السيليكا ، مثل إدخال مجموعات السيانو المحبة للماء (كما هو موضح في الجزء الأيمن من الشكل 1) ، لجعل سطح هلام السيليكا أكثر. وبالتالي ، يمكن تمديد سلاسل C18 على سطح السيليكا بالكامل في ظل ظروف مائية عالية ويمكن تجنب انهيار الطور مسعور. تسمى هذه الأعمدة C18 المعدلة أعمدة C18 المائية ، وهي أعمدة C18AQ ، والتي تم تصميمها لظروف شطف عالية للغاية ويمكن أن تتسامح مع الجهاز المائي بنسبة 100 ٪. تم تطبيق أعمدة C18AQ على نطاق واسع في فصل وتنقية المركبات القطبية القوية ، بما في ذلك الأحماض العضوية والببتيدات والنيوكليوسيدات والفيتامينات القابلة للذوبان في الماء.
يعد تحلية التحلية أحد التطبيقات النموذجية لأعمدة C18AQ في تنقية الفلاش للعينات ، والتي تزيل مكونات الملح أو العازلة في المذيبات العينة لتسهيل تطبيق العينة في الدراسات اللاحقة. في هذا المنشور ، تم استخدام FCF الأزرق الرائع مع قطبية قوية كعينة وتنقيتها على عمود C18AQ. تم استبدال المذيبات العينة بالمذيب العضوي من محلول المخزن المؤقت ، وبالتالي تسهيل التبخر الدوار التالي وكذلك توفير المذيبات ووقت التشغيل. علاوة على ذلك ، تم تحسين نقاء العينة عن طريق إزالة بعض الشوائب في العينة.
القسم التجريبي
الشكل 2. التركيب الكيميائي للعينة.
تم استخدام FCF الأزرق اللامع كعينة في هذا المنشور. كان نقاء العينة الخام 86 ٪ وتم إظهار التركيب الكيميائي للعينة في الشكل 2. لإعداد محلول العينة ، تم إذابة 300 ملغ من الصلبة البودرة من FCF الأزرق اللامع في محلول NAH2PO4 المخزن المؤقت وتهتز جيدًا ليصبح حلًا واضحًا تمامًا. ثم تم حقن محلول العينة في عمود الفلاش بواسطة حاقن. يتم سرد الإعداد التجريبي لتنقية الفلاش في الجدول 1.
| أداة | جهاز Sepabean ™2 | |||
| خراطيش | 12 G Sepaflash C18 RP Flash Cartridge (السيليكا الكروية ، 20-45 ميكرون ، 100 Å ، رقم الطلب: SW-5222-012-SP) | 12 G Sepaflash C18AQ RP Flash Cartridge (السيليكا الكروية ، 20-45 ميكرون ، 100 Å ، رقم الطلب ： SW-5222-012-SP (AQ)） | ||
| الطول الموجي | 254 نانومتر | |||
| المرحلة المتنقلة | مذيب ： الماء المذيبات ب ： الميثانول | |||
| معدل التدفق | 30 مل/دقيقة | |||
| تحميل العينة | 300 ملغ (FCF الأزرق اللامع مع نقاء 86 ٪) | |||
| التدرج | الوقت (السيرة الذاتية) | المذيبات ب (٪) | الوقت (السيرة الذاتية) | المذيبات ب (٪) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
النتائج والمناقشة
تم استخدام خرطوشة فلاش Sepaflash C18AQ RP لعينة تحلية وتنقية العينة. تم استخدام التدرج الخطوة التي تم استخدام المياه النقية كمرحلة متنقلة في بداية شطف وتشغيلها لأحجام العمود 10 (CV). كما هو مبين في الشكل 3 ، عند استخدام المياه النقية كطور متنقل ، تم الاحتفاظ بالعينة بالكامل على خرطوشة الفلاش. بعد ذلك ، تمت زيادة الميثانول في المرحلة المتنقلة مباشرة إلى 100 ٪ وتم الحفاظ على التدرج لمدة 7.5 سيرة ذاتية. تم إلغاء العينة من 11.5 إلى 13.5 سيرة ذاتية. في الكسور التي تم جمعها ، تم استبدال محلول العينة من محلول العازلة NAH2PO4 للميثانول. مقارنة مع المحلول المائي للغاية ، كان الميثانول أسهل بكثير في إزالته عن طريق التبخر الدوار في الخطوة اللاحقة ، مما يسهل البحث التالي.
الشكل 3. كروماتوجرام الفلاش للعينة على خرطوشة C18AQ.
لمقارنة سلوك الاحتفاظ بخرطوشة C18AQ وخرطوشة C18 العادية لعينات من قطبية قوية ، تم إجراء اختبار المقارنة المتوازي. تم استخدام خرطوشة فلاش Sepaflash C18 RP وتم عرض كروماتوجرام الفلاش للعينة في الشكل 4. لخراطيش C18 العادية ، تبلغ نسبة الطور المائي الأعلى حوالي 90 ٪. لذلك تم تعيين التدرج البدء بنسبة 10 ٪ الميثانول في 90 ٪ من الماء. كما هو مبين في الشكل 4 ، نظرًا لانهيار الطور مسعور لسلاسل C18 الناتجة عن نسبة مائية عالية ، تم الاحتفاظ بالعينة بالكاد على خرطوشة C18 العادية وتم إزالتها مباشرة بواسطة المرحلة المتنقلة. ونتيجة لذلك ، لا يمكن إكمال تشغيل عينة تحلية التحلية أو التنقية.
الشكل 4. كروماتوجرام الفلاش للعينة على خرطوشة C18 العادية.
مقارنة مع التدرج الخطي ، فإن استخدام التدرج الخطوة له المزايا التالية:
1. يتم تقليل استخدام المذيبات ووقت التشغيل لتنقية العينة.
2. المنتج المستهدف في ذروة حادة ، مما يقلل من حجم الكسور التي تم جمعها وبالتالي يسهل التبخر الدوار التالي وكذلك توفير الوقت.
3. المنتج الذي تم جمعه في الميثانول وهو سهل التبخير ، وبالتالي يتم تقليل وقت التجفيف.
في الختام ، لتنقية العينة التي هي قطبية قوية أو ماء للغاية ، يمكن أن توفر خراطيش Sepaflash C18AQ RP Flash الجمع بين آلة كروماتوجرافيا الفلاش التحضيرية Sepabean ™ حلًا سريعًا وفعالًا.
حول Sepaflash Bonded Series C18 RP خراطيش فلاش
هناك سلسلة من خراطيش فلاش Sepaflash C18AQ RP مع مواصفات مختلفة من تقنية Santai (كما هو موضح في الجدول 2).
| رقم البند | حجم العمود | معدل التدفق (مل/دقيقة) | max.pressure (PSI/BAR) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5.4 جم | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 غرام | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 جم | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 جم | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 غرام | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 جم | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 جم | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 جم | 40-80 | 250/17.2 |
الجدول 2. Sepaflash C18AQ RP خراطيش فلاش.
مواد التعبئة: C18 كروية عالية الكفاءة C18 (AQ)-السيليكا الموند ، 20-45 ميكرون ، 100 Å.
logy (كما هو موضح في الجدول 2).
وقت النشر: أغسطس -27-2018