ሆንግቼንግ ዋንግ፣ ቦ Xu
የመተግበሪያ R&D ማዕከል
መግቢያ
እንደ የቋሚ ደረጃ እና የሞባይል ደረጃ አንጻራዊ ፖላሪቲዎች፣ ፈሳሽ ክሮማቶግራፊ ወደ መደበኛ ደረጃ ክሮማቶግራፊ (NPC) እና የተገለበጠ ደረጃ ክሮማቶግራፊ (RPC) ሊከፋፈል ይችላል።ለ RPC፣ የተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ ዋልታነት ከቋሚ ደረጃው የበለጠ ጠንካራ ነው።RPC በከፍተኛ ብቃት ፣ ጥሩ ጥራት እና ግልጽ የማቆየት ዘዴ ምክንያት በፈሳሽ ክሮማቶግራፊ መለያ ዘዴዎች ውስጥ በብዛት ጥቅም ላይ የዋለ ሆኗል።ስለዚህ RPC የተለያዩ የዋልታ ወይም ያልሆኑ የዋልታ ውህዶች, አልካሎይድ, ካርቦሃይድሬት, fatty acids, ስቴሮይድ, ኑክሊክ አሲዶች, አሚኖ አሲዶች, peptides, ፕሮቲን, ወዘተ ጨምሮ የተለያዩ የዋልታ ወይም ያልሆኑ የዋልታ ውህዶች, ለመለየት እና ለማጥራት ተስማሚ ነው. የሲሊካ ጄል ማትሪክስ C18፣ C8፣ C4፣ phenyl፣ cyano፣ amino፣ ወዘተ ጨምሮ ከተለያዩ የተግባር ቡድኖች ጋር የተቆራኘ ነው።ከ 80% በላይ የ RPC አሁን C18 ቦንድድ ደረጃን እየተጠቀሙ ነው ተብሎ ይገመታል።ስለዚህ C18 ክሮማቶግራፊ አምድ ለእያንዳንዱ ላብራቶሪ የግድ የግድ ሁለንተናዊ አምድ ሆኗል።
ምንም እንኳን የ C18 አምድ በጣም ሰፊ በሆነ አፕሊኬሽኖች ውስጥ ጥቅም ላይ ሊውል ቢችልም, ለአንዳንድ ናሙናዎች በጣም ዋልታ ወይም ከፍተኛ ሃይድሮፊል, መደበኛ የ C18 አምዶች እንደነዚህ ያሉትን ናሙናዎች ለማጣራት በሚጠቀሙበት ጊዜ ችግር ሊኖርባቸው ይችላል.በ RPC ውስጥ፣ በብዛት ጥቅም ላይ የሚውሉት የኤሌክትሮማግኔቲክ ፈሳሾች እንደ ፖላሪታቸው ሊታዘዙ ይችላሉ፡ ውሃ <ሜታኖል <አቴቶኒትሪል < ethanol < tetrahydrofuran < isopropanol .ለእነዚህ ናሙናዎች (ኃይለኛ ዋልታ ወይም ከፍተኛ ሃይድሮፊል) በአምዱ ላይ ጥሩ መቆየትን ለማረጋገጥ ከፍተኛ መጠን ያለው የውሃ ስርዓት እንደ ተንቀሳቃሽ ደረጃ ጥቅም ላይ ይውላል።ነገር ግን የንፁህ ውሃ ስርዓትን (ንፁህ ውሃ ወይም ንፁህ የጨው መፍትሄን ጨምሮ) እንደ ሞባይል ደረጃ ሲጠቀሙ ፣ በ C18 አምድ ቋሚ ደረጃ ላይ ያለው ረዥም የካርቦን ሰንሰለት ውሃውን ለማስወገድ እና እርስ በእርስ ይደባለቃል ፣ ይህም በቅጽበት መቀነስ ያስከትላል። የአምዱ የማቆየት አቅም ወይም ሌላው ቀርቶ ምንም ማቆየት.ይህ ክስተት "የሃይድሮፎቢክ ደረጃ ውድቀት" (በስእል 1 ግራ ክፍል ላይ እንደሚታየው) ይባላል.ምንም እንኳን ምሰሶው እንደ ሜታኖል ወይም አሴቶኒትሪል ባሉ ኦርጋኒክ መሟሟቶች ሲታጠብ ይህ ሁኔታ ሊለወጥ የሚችል ቢሆንም አሁንም በአምዱ ላይ ጉዳት ሊያደርስ ይችላል.ስለዚህ, ይህ ሁኔታ እንዳይከሰት መከላከል ያስፈልጋል.
ምስል 1. በመደበኛ C18 አምድ (በግራ) እና በ C18AQ አምድ (በስተቀኝ) ላይ በሲሊካ ጄል ወለል ላይ የታሰሩ ደረጃዎች ንድፍ ንድፍ።
ከላይ የተጠቀሱትን ችግሮች ለመፍታት የ chromatographic ማሸጊያ እቃዎች አምራቾች ቴክኒካዊ ማሻሻያዎችን አድርገዋል.ከእነዚህ ማሻሻያዎች ውስጥ አንዱ በሲሊካ ማትሪክስ ላይ አንዳንድ ማሻሻያዎችን እያደረገ ነው, ለምሳሌ የሃይድሮፊሊክ ሳይያኖ ቡድኖችን ማስተዋወቅ (በስእል 1 ትክክለኛው ክፍል ላይ እንደሚታየው) የሲሊካ ጄል ወለል የበለጠ ሃይድሮፊሊቲክ እንዲሆን ማድረግ.ስለዚህ በሲሊካ ወለል ላይ ያሉት C18 ሰንሰለቶች በከፍተኛ የውሃ ሁኔታዎች ውስጥ ሙሉ በሙሉ ሊራዘሙ ይችላሉ እና የሃይድሮፎቢክ ደረጃ ውድቀትን ማስቀረት ይችላሉ።እነዚህ የተሻሻሉ C18 ዓምዶች የውሃ C18 አምዶች ይባላሉ ማለትም C18AQ አምዶች ለከፍተኛ የውሃ ከፍታ ሁኔታዎች የተነደፉ እና 100% የውሃ ስርዓትን መቋቋም ይችላሉ።C18AQ አምዶች ኦርጋኒክ አሲዶችን፣ peptides፣ nucleosides እና ውሃ የሚሟሟ ቪታሚኖችን ጨምሮ ጠንካራ የዋልታ ውህዶችን በመለየት እና በማጣራት በሰፊው ተተግብረዋል።
Desalting ለ ናሙናዎች ብልጭታ የመንጻት ውስጥ C18AQ አምዶች ዓይነተኛ መተግበሪያዎች አንዱ ነው, ይህም በቀጣይ ጥናቶች ውስጥ ናሙና ማመልከቻ ለማመቻቸት ናሙና የማሟሟት ውስጥ ያለውን ጨው ወይም ቋት ክፍሎች ያስወግዳል.በዚህ ልጥፍ ውስጥ፣ ብርቱ ዋልታ ያለው ብሩህ ሰማያዊ ኤፍሲኤፍ እንደ ናሙና እና በC18AQ አምድ ላይ ተጠርቷል።የናሙና ሟሟ በኦርጋኒክ ሟሟ ከጠባቂ መፍትሄ ተተክቷል፣ ስለዚህም የሚከተለውን የማሽከርከር ትነት ማመቻቸት እንዲሁም መፈልፈያዎችን እና የስራ ጊዜን ይቆጥባል።በተጨማሪም, በናሙናው ውስጥ አንዳንድ ቆሻሻዎችን በማስወገድ የናሙናው ንጽሕና ተሻሽሏል.
የሙከራ ክፍል
ምስል 2. የናሙና ኬሚካላዊ መዋቅር.
ብሩህ ሰማያዊ ኤፍሲኤፍ በዚህ ልጥፍ ውስጥ እንደ ናሙና ጥቅም ላይ ውሏል።የጥሬው ናሙና ንፅህና 86% ሲሆን የናሙና ኬሚካላዊ መዋቅር በስእል 2 ይታያል። የናሙና መፍትሄውን ለማዘጋጀት 300 ሚሊ ግራም የዱቄት ድፍድፍ የብራይሊየንት ብሉ ኤፍሲኤፍ በ 1 M NaH2PO4 ቋት መፍትሄ ውስጥ ተፈትቶ በጥሩ ሁኔታ ተንቀጠቀጠ። ሙሉ በሙሉ ግልጽ የሆነ መፍትሄ.የናሙና መፍትሄው ወደ ፍላሽ አምድ በመርፌ ተወጋ።የፍላሽ ማጽጃው የሙከራ ቅንብር በሰንጠረዥ 1 ውስጥ ተዘርዝሯል።
| መሳሪያ | SepaBean ™ ማሽን2 | |||
| ካርትሬጅዎች | 12 ግ SepaFlash C18 RP ፍላሽ ካርቶን (ሉላዊ ሲሊካ፣ 20 - 45 μm፣ 100 Å፣ የትዕዛዝ ቁጥር፡ SW-5222-012-SP) | 12 ግ SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርቶን (ሉላዊ ሲሊካ፣ 20 - 45 μm፣ 100 Å፣ የትዕዛዝ ቁጥር：SW-5222-012-SP(AQ))) | ||
| የሞገድ ርዝመት | 254 nm | |||
| የሞባይል ደረጃ | መሟሟት A: ውሃ የሚሟሟ ቢ: ሜታኖል | |||
| የአፈላለስ ሁኔታ | 30 ሚሊ ሊትር / ደቂቃ | |||
| የናሙና ጭነት | 300 mg (ብሩህ ሰማያዊ FCF ከ 86 ንፅህና ጋር) | |||
| ግራዲየንት | ጊዜ (ሲቪ) | ሟሟ (%) | ጊዜ (ሲቪ) | ሟሟ (%) |
| 0 | 10 | 0 | 0 | |
| 10 | 10 | 10 | 0 | |
| 10.1 | 100 | 10.1 | 100 | |
| 17.5 | 100 | 17.5 | 100 | |
| 17.6 | 10 | 17.6 | 0 | |
| 22.6 | 10 | 22.6 | 0 | |
ውጤቶች እና ውይይት
የSepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርቶን ለናሙና ማጽዳት እና ማጽዳት ስራ ላይ ውሏል።ደረጃ ቅልመት ጥቅም ላይ የዋለው ንጹህ ውሃ እንደ ተንቀሳቃሽ ደረጃ በ elution መጀመሪያ ላይ ጥቅም ላይ የዋለ እና ለ 10 አምድ ጥራዞች (CV) ነው።በስእል 3 ላይ እንደሚታየው ንጹህ ውሃ እንደ ተንቀሳቃሽ ደረጃ ሲጠቀሙ, ናሙናው ሙሉ በሙሉ በፍላሽ ካርቶሪ ላይ እንዲቆይ ተደርጓል.በመቀጠል በሞባይል ደረጃ ውስጥ ያለው ሜታኖል በቀጥታ ወደ 100% ጨምሯል እና ቅልጥፍናው ለ 7.5 CV ተጠብቆ ቆይቷል።ናሙናው ከ 11.5 እስከ 13.5 CV ወጥቷል.በተሰበሰቡ ክፍልፋዮች ውስጥ, የናሙና መፍትሄው ከ NaH2PO4 ቋት መፍትሄ ወደ ሚታኖል ተተክቷል.ከፍተኛ የውሃ መፍትሄ ጋር በማነፃፀር ሜታኖል በሚቀጥለው ደረጃ በ rotary evaporation ለማስወገድ በጣም ቀላል ነበር, ይህም የሚከተሉትን ጥናቶች ያመቻቻል.
ምስል 3. በ C18AQ ካርቶን ላይ ያለው የናሙና ብልጭታ ክሮሞግራም.
የC18AQ cartridge እና መደበኛ C18 cartridge የማቆየት ባህሪን ለጠንካራ ዋልታ ናሙናዎች ለማነፃፀር ትይዩ የንፅፅር ሙከራ ተካሂዷል።የSepaFlash C18 RP ፍላሽ ካርቶን ጥቅም ላይ የዋለ ሲሆን የናሙናው ፍላሽ ክሮማቶግራም በስእል 4 ይታያል። ለመደበኛ C18 cartridges ከፍተኛው የሚፈቀደው የውሃ ደረጃ ሬሾ 90% ያህል ነው።ስለዚህ የጅማሬ ቅልመት በ 90% ውሃ ውስጥ 10% ሜታኖል ላይ ተቀምጧል.በስእል 4 ላይ እንደሚታየው የC18 ሰንሰለቶች በከፍተኛ የውሃ ሬሾ ምክንያት በተፈጠረው የሃይድሮፎቢክ ምዕራፍ ውድቀት ምክንያት ናሙናው በመደበኛው የC18 ካርትሬጅ ላይ ብዙም ሳይቆይ በተንቀሳቃሽ ስልክ ደረጃ ተለቅቋል።በውጤቱም, የናሙና ማረም ወይም ማጽዳት ሥራ ሊጠናቀቅ አይችልም.
ምስል 4. የናሙናው ብልጭታ chromatogram በመደበኛ C18 ካርቶጅ ላይ።
ከመስመር ቅልመት ጋር በማነፃፀር የእርምጃ ቅልመት አጠቃቀም የሚከተሉትን ጥቅሞች አሉት።
1. ለናሙና ማጣሪያ የሟሟ አጠቃቀም እና የማስኬጃ ጊዜ ቀንሷል።
2. የታለመው ምርት በሹል ጫፍ ውስጥ ይወጣል, ይህም የተሰበሰቡ ክፍልፋዮችን መጠን ይቀንሳል እና ስለዚህ የሚከተለውን የ rotary evaporation እንዲሁም ጊዜን ይቆጥባል.
3. የተሰበሰበው ምርት በሜታኖል ውስጥ በቀላሉ በቀላሉ ለመትነን ነው, ስለዚህ የማድረቅ ጊዜ ይቀንሳል.
ለማጠቃለል፣ ናሙናውን በጠንካራ ዋልታ ወይም በከፍተኛ ሃይድሮፊል ለማጥራት፣ SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርትሬጅ ከመሰናዶ ፍላሽ ክሮማቶግራፊ ሲስተም ሴፓቢን ™ ማሽን ጋር በማጣመር ፈጣን እና ቀልጣፋ መፍትሄ ሊሰጥ ይችላል።
ስለ SepaFlash Bonded Series C18 RP flash cartridges
ከሳንታይ ቴክኖሎጂ (በሠንጠረዥ 2 ላይ እንደሚታየው) ተከታታይ የSepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርትሬጅ የተለያዩ መግለጫዎች አሉ።
| ንጥል ቁጥር | የአምድ መጠን | የአፈላለስ ሁኔታ (ሚሊ/ደቂቃ) | ከፍተኛ ግፊት (psi/ባር) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5.4 ግ | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 ግ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 ግ | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 ግ | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 ግ | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 ግ | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 ግ | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 ግ | 40-80 | 250/17.2 |
ሠንጠረዥ 2. SepaFlash C18AQ RP ፍላሽ ካርቶሪዎች.
የማሸጊያ እቃዎች: ከፍተኛ-ውጤታማ ሉላዊ C18 (AQ) - ቦንድ ሲሊካ, 20 - 45 μm, 100 Å.
logy (በሠንጠረዥ 2 ላይ እንደሚታየው).
የልጥፍ ጊዜ: ኦገስት-27-2018