Mingzu Yang, Bo Xu
Aansoek R&D Sentrum
Inleiding
Antibiotika is 'n klas sekondêre metaboliete wat geproduseer word deur mikroörganismes (insluitend bakterieë, swamme, aktinomisete) of soortgelyke verbindings wat chemies gesintetiseer of semi-gesintetiseer is.Antibiotika kan die groei en oorlewing van ander mikroörganismes inhibeer.Die eerste antibiotika wat deur die mens ontdek is, penisillien, is in 1928 deur die Britse mikrobioloog Alexander Fleming ontdek. Hy het opgemerk dat die bakterieë in die omgewing van die skimmel nie kon groei in die stafilokokke-kultuurskottel wat met skimmel besmet was nie.Hy het gepostuleer dat die skimmel 'n antibakteriese stof moet afskei, wat hy in 1928 penisillien genoem het. Die aktiewe bestanddele was egter nie destyds gesuiwer nie.In 1939 het Ernst Chain en Howard Florey van Oxford Universiteit besluit om 'n middel te ontwikkel wat bakteriële infeksies kan behandel.Nadat hulle Fleming gekontak het om stamme te verkry, het hulle penisillien suksesvol uit die stamme onttrek en gesuiwer.Vir hul suksesvolle ontwikkeling van penisillien as 'n terapeutiese middel, het Fleming, Chain en Florey die 1945 Nobelprys in Geneeskunde gedeel.
Antibiotika word as antibakteriese middels gebruik om bakteriële infeksies te behandel of te voorkom.Daar is verskeie hoofkategorieë antibiotika wat as antibakteriese middels gebruik word: β-laktam antibiotika (insluitend penisillien, kefalosporien, ens.), aminoglikosied antibiotika, makrolied antibiotika, tetrasiklien antibiotika, chlooramfenikol (totale sintetiese antibiotika), en ens. Die bronne van antibiotika sluit in biologiese fermentasie, semi-sintese en totale sintese.Die antibiotika wat deur biologiese fermentasie geproduseer word, moet struktureel deur chemiese metodes verander word as gevolg van chemiese stabiliteit, toksiese newe-effekte, antibakteriese spektrum en ander kwessies.Nadat dit chemies aangepas is, kan die antibiotika verhoogde stabiliteit, verminderde toksiese newe-effekte, uitgebreide antibakteriese spektrum, verminderde middelweerstand, verbeterde biobeskikbaarheid, en daardeur verbeterde effek van geneesmiddelbehandeling bereik.Daarom is semi-sintetiese antibiotika tans die gewildste rigting in die ontwikkeling van antibiotiese middels.
In die ontwikkeling van semi-sintetiese antibiotika, het antibiotika die eienskappe van lae suiwerheid, baie neweprodukte en komplekse komponente aangesien dit afkomstig is van mikrobiese fermentasieprodukte.In hierdie geval is die ontleding en beheer van onsuiwerhede in semi-sintetiese antibiotika veral belangrik.Om onsuiwerhede effektief te identifiseer en te karakteriseer, is dit nodig om 'n voldoende hoeveelheid onsuiwerhede uit die sintetiese produk van semi-sintetiese antibiotika te verkry.Onder die algemeen gebruikte onsuiwerheidsvoorbereidingstegnieke is flitschromatografie 'n koste-effektiewe metode met voordele soos groot monsterlaaihoeveelheid, lae koste, tydbesparing, ens. Flitschromatografie word al hoe meer deur sintetiese navorsers gebruik.
In hierdie pos is die hoofonreinheid van 'n semi-sintetiese aminoglikosied-antibiotikum as die monster gebruik en gesuiwer deur 'n SepaFlash C18AQ-patroon gekombineer met die flitschromatografiestelsel SepaBean™-masjien.Die teikenproduk wat aan die vereistes voldoen, is suksesvol verkry, wat 'n hoogs doeltreffende oplossing vir die suiwering van hierdie verbindings voorstel.
eksperimentele afdeling
Die monster is vriendelik verskaf deur 'n plaaslike farmaseutiese maatskappy.Die monster was 'n soort aminopolisikliese koolhidrate en sy molekulêre struktuur was soortgelyk aan aminoglikosied antibiotika.Die polariteit van die monster was redelik hoog, wat dit baie oplosbaar in water maak.Die skematiese diagram van die monster se molekulêre struktuur is in Figuur 1 getoon. Die suiwerheid van die rou monster was ongeveer 88% soos ontleed deur HPLC.Vir die suiwering van hierdie verbindings met hoë polariteit, sou die monster skaars op die gewone C18-kolomme behou word volgens ons vorige ervarings.Daarom is 'n C18AQ kolom gebruik vir die monster suiwering.
Figuur 1. Die skematiese diagram van die monster se molekulêre struktuur.
Om die monsteroplossing voor te berei, is 50 mg ru-monster in 5 mL suiwer water opgelos en dan met ultrasoniese behandeling gemaak om dit 'n heeltemal helder oplossing te maak.Die monsteroplossing is dan deur 'n inspuiter in die flitskolom ingespuit.Die eksperimentele opstelling van die flitssuiwering is in Tabel 1 gelys.
| Instrument | SepaBean™-masjien 2 | |
| Patrone | 12 g SepaFlash C18AQ RP-flitspatroon (sferiese silika, 20 - 45μm, 100 Å, bestelnommer:SW-5222-012-SP(AQ)) | |
| Golflengte | 204 nm, 220 nm | |
| Mobiele fase | Oplosmiddel A: Water Oplosmiddel B: Asetonitril | |
| Vloeitempo | 15 ml/min | |
| Monster laai | 50 mg | |
| Gradiënt | Tyd (min) | Oplosmiddel B (%) |
| 0 | 0 | |
| 19,0 | 8 | |
| 47,0 | 80 | |
| 52,0 | 80 | |
Resultate en bespreking
Die flitschromatogram van die monster op die C18AQ-patroon is in Figuur 2 getoon. Soos in Figuur 2 getoon, is die hoogs polêre monster effektief op die C18AQ-patroon behou.Na lyofolisering vir die versamelde fraksies het die teikenproduk 'n suiwerheid van 96.2% gehad (soos in Figuur 3 getoon) deur HPLC-analise.Die resultate het aangedui dat die gesuiwerde produk verder benut kan word in die volgende stap navorsing en ontwikkeling.
Figuur 2. Die flitschromatogram van die monster op 'n C18AQ-patroon.
Figuur 3. Die HPLC-chromatogram van die teikenproduk.
Ten slotte, SepaFlash C18AQ RP flitspatroon gekombineer met die flitschromatografiestelsel SepaBean™-masjien kan 'n vinnige en effektiewe oplossing bied vir die suiwering van hoogs polêre monsters.
Oor die SepaFlash C18AQ RP-flitspatrone
Daar is 'n reeks van die SepaFlash C18AQ RP-flitspatrone met verskillende spesifikasies van Santai Tegnologie (soos in Tabel 2 getoon).
| Item nommer | Kolomgrootte | Vloeitempo (ml/min) | Maks.druk (psi/bar) |
| SW-5222-004-SP(AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27,5 |
| SW-5222-012-SP(AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-025-SP(AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27,5 |
| SW-5222-040-SP(AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27,5 |
| SW-5222-080-SP(AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24,0 |
| SW-5222-120-SP(AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20,7 |
| SW-5222-220-SP(AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20,7 |
| SW-5222-330-SP(AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17,2 |
Tabel 2. SepaFlash C18AQ RP flitspatrone.Verpakkingsmateriaal: Hoë-doeltreffendheid sferiese C18(AQ)-gebonde silika, 20 - 45 μm, 100 Å.
Vir verdere inligting oor gedetailleerde spesifikasies van SepaBean™-masjien, of die bestelinligting oor SepaFlash-reeks flitspatrone, besoek asseblief ons webwerf.
Plaas tyd: Okt-26-2018