Rui Huang, Bo Xu
Toepassing R & D -sentrum
Bekendstelling
'N Peptied is 'n verbinding wat bestaan uit aminosure, wat elk unieke fisiese en chemiese eienskappe het as gevolg van die verskillende soorte en orde van aminosuurreste wat die volgorde vorm. Met die ontwikkeling van chemiese sintese van vaste fase, het die chemiese sintese van verskillende aktiewe peptiede groot vordering gemaak. Vanweë die ingewikkelde samestelling van die peptied wat deur vaste fase -sintese verkry is, moet die finale produk egter deur betroubare skeidingsmetodes gesuiwer word. Die algemeen gebruikte suiweringsmetodes vir peptiede sluit in Ion Exchangechromatography (IEC) en omgekeerde fase hoëprestasie vloeistofchromatografie (RP-HPLC), wat die nadele van lae monsterbelastingvermoë het, 'n hoë koste van skeidingsmedia, ingewikkelde en duur skeidingstoerusting, ens. Vir die vinnige suiwering van klein molekules met Peptides (MW <1 KDA), was 'n suksesvolle aanwending van die SUNTI-peptiede (MW <1 KDA), 'n suksesvolle aanwending waarin 'n sepaflash RP C18-patroon gebruik is vir die vinnige suiwering van tymopentien (TP-5) en die teikenproduk wat aan die vereistes voldoen.
Figuur 1. 20 Algemene aminosure (gereproduseer vanaf www.bachem.com).
Daar is 20 soorte aminosure wat algemeen voorkom in die samestelling van peptiede. Hierdie aminosure kan in die volgende groepe verdeel word volgens hul polariteit en suur-basis-eienskap: nie-polêr (hidrofobies), polêr (onaanleg), suur of basies (soos getoon in Figuur 1). In 'n peptiedvolgorde, as die aminosure wat die volgorde uitmaak, meestal pool is (soos gemerk in pienk kleur in Figuur 1), soos cysteïne, glutamien, asparagien, serien, treonien, tyrosien, ens. Dan kan hierdie peptied 'n sterk polariteit hê en baie oplosbaar in water wees. Tydens die suiweringsprosedure vir hierdie sterk polêre peptiedmonsters deur omgekeerde fase-chromatografie, sal 'n verskynsel genaamd hidrofobiese fase-ineenstorting plaasvind (verwys na 'n voorheen gepubliseerde toepassingsnota deur Santai Technologies: Hydrofobic Phase Collapse, AQ omgekeerde fasechromatografie-kolomme en hul toepassings). In vergelyking met die gewone C18 -kolomme, is die verbeterde C18AQ -kolomme die beste geskik vir die suiwering van sterk polêre of hidrofiliese monsters. In hierdie pos is 'n sterk polêre peptied as die monster gebruik en deur 'n C18AQ -kolom gesuiwer. Gevolglik is die teikenproduk wat aan die vereistes voldoen, verkry en kon dit in die volgende navorsing en ontwikkeling gebruik word.
| Instrument | Sepabean™masjien 2 | |||
| Cartridges | 12 G Sepaflash C18 RP Flashpatroon (sferiese silika, 20-45 μm, 100 Å, bestel nunber ： SW-5222-012-sp) | 12 G Sepaflash C18AQ RP-flitspatroon (sferiese silika, 20-45 μm, 100 Å, bestelnommer ： SW-5222-012-SP (aq)) | ||
| Golflengte | 254 nm, 220 nm | 214 nm | ||
| Mobiele fase | Oplosmiddel A: Water Oplosmiddel B: asetonitril | |||
| Vloeitempo | 15 ml/min | 20 ml/min | ||
| Monster laai | 30 mg | |||
| Gradiënt | Tyd (CV) | Oplosmiddel B (%) | Tyd (min) | Oplosmiddel B (%) |
| 0 | 0 | 0 | 4 | |
| 1.0 | 0 | 1.0 | 4 | |
| 10.0 | 6 | 7.5 | 18 | |
| 12.5 | 6 | 13.0 | 18 | |
| 16.5 | 10 | 14.0 | 22 | |
| 19.0 | 41 | 15.5 | 22 | |
| 21.0 | 41 | 18.0 | 38 | |
| / | / | 20.0 | 38 | |
| 22.0 | 87 | |||
| 29.0 | 87 | |||
Resultate en bespreking
Om die suiweringsprestasie vir die polêre peptiedmonster tussen die gewone C18 -kolom en C18AQ -kolom te vergelyk, het ons 'n gewone C18 -kolom gebruik vir die flitssuiwering van die monster as begin. Soos getoon in Figuur 2, is die monster skaars op die gewone C18 -patroon, as gevolg van die hidrofobiese fase -ineenstorting van die C18 -kettings wat veroorsaak word deur 'n hoë waterige verhouding, en is direk deur die mobiele fase geëlueer. As gevolg hiervan was die monster nie effektief geskei en gesuiwer nie.
Figuur 2. Die flitschromatogram van die monster op 'n gewone C18 -patroon.
Vervolgens het ons 'n C18AQ -kolom gebruik vir die flitssuiwering van die monster. Soos getoon in Figuur 3, is die peptied effektief op die kolom behou en daarna uitgeroei. Die teikenproduk is van die onsuiwerhede in die rou monster geskei en versamel. Na lyofilisasie en dan deur HPLC ontleed word, het die gesuiwerde produk 'n suiwerheid van 98,2% en kan dit verder gebruik word vir volgende stapnavorsing en -ontwikkeling.
Figuur 3. Die flitschromatogram van die monster op 'n C18AQ -patroon.
Ten slotte, Sepaflash C18AQ RP -flitspatroon gekombineer met die flitschromatografiestelsel Sepabean™Masjien kan 'n vinnige en effektiewe oplossing bied vir die suiwering van sterk polêre of hidrofiliese monsters.
Daar is 'n reeks van die Sepaflash C18AQ RP -flitspatrone met verskillende spesifikasies van Santai -tegnologie (soos aangetoon in Tabel 2).
| Itemnommer | Kolomgrootte | Vloeitempo (ML/min) | Max.pressure (PSI/balk) |
| SW-5222-004-SP (AQ) | 5,4 g | 5-15 | 400/27.5 |
| SW-5222-012-SP (AQ) | 20 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-025-SP (AQ) | 33 g | 10-25 | 400/27.5 |
| SW-5222-040-SP (AQ) | 48 g | 15-30 | 400/27.5 |
| SW-5222-080-SP (AQ) | 105 g | 25-50 | 350/24.0 |
| SW-5222-120-SP (AQ) | 155 g | 30-60 | 300/20.7 |
| SW-5222-220-SP (AQ) | 300 g | 40-80 | 300/20.7 |
| SW-5222-330-SP (AQ) | 420 g | 40-80 | 250/17.2 |
Tabel 2. Sepaflash C18AQ RP -flitspatrone. Verpakkingmateriaal: Sferiese C18 (AQ) -gebonde silika, 20-45 μm, 100 Å.
Besoek ons webwerf vir meer inligting oor die gedetailleerde spesifikasies van die Sepabean ™ -masjien, of die bestelinligting oor die SepaFlash -reeks Flash Cartridges.
Postyd: Okt-12-2018